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糖タンパク質の小胞体品質管理機構

糖蛋白内质网质量控制机制

基本信息

批准号：
17046009
负责人：
細川暢子
金额：
$ 3.07万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究において、糖鎖によるタンパク質の小胞体品質管理機構の解析を行った。まず、糖タンパク質の小胞体関連分解(ERAD)におけるN結合型糖鎖の役割を明らかにするため、糖鎖をもたない基質変異体を作製して細胞内分解速度を検討したところ、糖鎖の数が減少すると、ERADによる分解速度が促進されることが明らかになった。次に、小胞体ストレによって、誘導されてくる遺伝子として、TRAP(translocon associated protein)のひとつのサブユニットを同定したので、TRAPタンパク質複合体の機能解析を行い、糖タンパク質の品質管理に及ぼす影響を検討した。TRAPは、小胞体膜上に存在し、4つのサブユニットからなる複合体を形成し、トランスロコンに結合することが知られているが、その生理機能に関しては十分解明されていない。TRAP複合体を形成する他のサブユニットに関しても検討した結果、いずれのサブユニットも小胞体ストレスによって同時に発現が誘導されることが明らかになつた。RNAi法を用いてTRAPのサブユニットをノックダウンしたところ、サブユニットタンパク質のいずれかひとつをノックダウンすると、TRAP複合体の発現量が低下することが示された。この時、ミスフォールドしたタンパク質のERADによる細胞内分解速度が低下することから、TRAP複合体が、基質タンパク質の認識、逆行輸送に関与する可能性が示唆された。また、糖タンパク質のERADに関与する、EDEMタンパク質の機能解析を引き続いて行っている。哺乳類のEDEMタンパク質には3つのホモログタンパク質が存在する。それぞれのタンパク質の生化学的性状を明らかにするため、リコンビナントタンパク質の大量発現系構築を検討している。さらに、EDEMタンパク質のマウス個体における機能を解明するために、ノックアウトマウスの作出を行い、バッククロスを行っている。

In this study, the analysis of quality control mechanism of small cells was carried out. The rate of intracellular degradation of N-bound glycogen was measured by measuring the number of glycogen locks and the rate of ERAD degradation. In this paper, we discuss the function analysis of TRAP(translocon associated protein) complex, the quality control of carbohydrate and the influence of protein on the quality control of carbohydrate. TRAP exists on the membrane of small cells, and its physiological function is very clear. The TRAP complex is formed in the presence of other cells, resulting in the detection of the TRAP complex and the detection of the TRAP complex in the presence of other cells. The RNAi method is used to detect TRAP complexes and reduce the occurrence of TRAP complexes. At this time, the intracellular breakdown rate of the matrix substance ERAD is reduced, which raises the possibility that the TRAP complex, the understanding of the matrix substance, and retrograde transport are involved. The function analysis of EDEM and ERAD is conducted in the following ways: Mammalian EDEM species exist in the world. The biochemical characteristics of the various species are discussed in detail. In addition, EDEM can be used to explain the function of the individual body, and the operation of the individual body.