蛋白質リン酸化酵素PKN1ノックアウトマウスを用いた記憶・学習機構の解析

使用蛋白激酶 PKN1 敲除小鼠分析记忆和学习机制

• 批准号: 18022025
• 负责人: 向井 秀幸
• 金额: $ 2.69万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18022025/
• 关键词: ノックアウトマウス; 低分子量GTP結合タンパク質; Rho; PKN; 長期増強(long term potentiation); 長期抑圧(long term depression); 海馬

我々は脂肪酸および低分子量GTP結合蛋白質Rho依存的セリン・トレオニンタンパク質リン酸化酵素PKN1を発見・同定し、主に相互作用因子の探索を通じて、この酵素の細胞内シグナル伝達経路への位置づけを試みてきた。PKN1aノックアウトマウスの海馬スライス標本を用いた電気生理学的実験を行ったところ、Schaffer collateral高頻度テタヌス刺激後CA1領域においてhomosynaptic long-term potentiation(LTP、長期増強)に伴って、野生型マウスでは認められないheterosynaptic long-term depression(LTD、長期抑圧)が観察されたことを昨年度報告した。このことについて今年度、解剖学的視点および生化学的視点から検討を加えた。23-24週齢マウスについて海馬および小脳における錐体細胞やプルキンニェ細胞のスパイン数や形状等について顕微鏡的検討を行ったが、変異マウスと野生型で優位差を検出することはできなかった。またノックアウトマウス脳をもちいたリン酸化プロテオーム解析を行ったが、現在のところ無刺激状態で優位にリン酸化レベルの異なるタンパク質は同定できていない。また各種リン酸化抗体をもちいた解析において、PKN1aノックアウトマウス海馬におけるGluRアイソフォームのin vivoリン酸化レベルの有意な変化は検出できていない。また今年度PKN1(PKN1a+PKN1b)のkinase negativeノックインマウスを作製した。さらにPKN1アイソフォームであるPKN2についてもconditional KOマウスを作製した。現在これらをもちいて、脳可塑性におけるPKNの機能解析を進めている。

We have explored the identification, identification and key interaction factors of fatty acid and low molecular weight GTP binding protein rho-dependent protein PKN1, and the location of intracellular pathway of this enzyme. PKN1a is a highly frequent form of hippocampal long-term potentiation(LTP) associated with wild-type long-term depression(LTD). This year, anatomical point of view and biochemical point of view are discussed. 23-24 The number of pyramidal cells in the hippocampus and the shape of the pyramidal cells in the hippocampus are different from those in the wild type. It's a very good idea to have a good time, but it's not a good idea. All kinds of protein acidification antibodies are analyzed in vivo, PKN1a is used to detect the protein in hippocampus, and GluR is used to detect the protein in vivo. This year PKN1(PKN1a+PKN1b) kinase-negative is controlled. PKN1, PKN2, PKN3, PKN4, PKN5, PKN6, PKN7, PKN8, PKN9, PKN9, PKN Now, the function analysis of PKN is advanced.

项目成果

Fragmentation of Protein Kinase N (PKN) in the Hydrocephalic Rat Brain. Acta Histochem Cytochem.

脑积水大鼠脑中蛋白激酶 N (PKN) 的断裂。

• 发表时间: 2007
• 期刊: Acta Histochem Cytochem. 40
• 作者: 中野賢二;藤井輝彦;山名秀明;桑野信彦;Huang CC;Huang CC;Okii N
• 通讯作者: Okii N

Purification and Kinase assay of PKN

PKN 的纯化和激酶测定

• 发表时间: 2005
• 期刊: Methods in Enzymology, Small GTPases(Elsevier) (in press)
• 作者: Mukai;H.;Ono;Y
• 通讯作者: Y

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• 发表时间: 2007
• 作者: Huang;CC;Wang;JM;Kikkawa;U;Mukai;H;Shen;MR;Morita;I;Chen;BK;Chang;WC;志賀一博;向井秀幸
• 通讯作者: 向井秀幸

ゲノム科学

基因组科学

• 发表时间: 2008
• 作者: Mukai;H;Kuno;Y;向井秀幸;向井秀幸
• 通讯作者: 向井秀幸

PKN特異的認識モチーフの固定とPKNリン酸化活性阻害ペプチドの開発

PKN特异性识别基序的固定化和PKN磷酸化活性抑制肽的开发

• 发表时间: 2007
• 作者: Mukai;H.;志賀一博
• 通讯作者: 志賀一博