新しい内在性小分子RNAによるDECODE調節機構とRNAiの関係の解明

一种新的内源性小RNA阐明DECODE调控机制与RNAi之间的关系

基本信息

  • 批准号:
    18055018
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 4.8万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    2006
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2006 至 2007
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

RNAiとは真核生物の細胞に二本鎖RNAを導入した場合に相同配列を持つ遺伝子の発現抑制が生じる現象であり、遺伝子発現を制御する新しい手段として有用である。我々は線虫C. elegansをモデル生物として用いてRNAiの反応機構について研究を行っている。これまで不十分であった生化学的な解析を進めるために、線虫の細胞抽出液を用いてRNAiを再現する無細胞反応系を本研究の準備期間に開発してきた。前年度の研究において、線虫の細胞抽出液中で長いRNAの導入に伴ってsiRNAに類似した小分子RNAを産生するRNA依存性RNAポリメラーゼ(RdRP)の活性を見いだしていた。本年度にさらに詳しい解析を進めたところ、そのRdRP活性はRdRPドメインを持つRRF-1に主として対応することが分かった。そして、RRF-1複合体によってin vitroで合成された小分子RNAはDicerの産物である一次型siRNAとは構造が異なっており二次型siRNAの特徴を持っていること、RRF-1が合成した産物の多くは5'末端にグアニンを持つことを明らかとした。又、線虫におけるRNAi反応下流におけるmRNAの配列特異的な切断(RISC)活性を無細胞反応系で検出してきており、その活性を担う分子実体を探索した。様々なRNAi欠損変異体から細胞抽出液を調製しRISC活性を測定する実験を行った結果、二次型siRNAによって誘導されるRISC活性がArgonaute変異体の一つであるcsr-1において損なわれていることを見つけた。又、CSR-1のリコンビナント蛋白が二次型siRNAと一緒にmRNA切断活性を示すことも確認した。
RNAi, Eukaryotic, Cellular, ordinary University, RNA, Co-ordinated, the same arrangement, the same, the same. We use the anti-RNAi mechanism to conduct research and conduct research in the biological laboratory of C. elegans. The chemical analysis of biochemistry is not very important. The extraction solution of the insect cell was detected by RNAi. In the preparation period of this study, the recombinant cell reaction system was established. In the previous year, we studied the activity of long-term RNA in the cell extract of worms, which is similar to that of small molecules RNA, RNA dependence, RNA dependence (RdRP) activity. This year, we need to improve the performance of the RdRP activity RdRP system. This year, we will be responsible for the overall performance of the RRF-1. The small molecule RNA, the Dicer complex, the in vitro, the small molecule RNA, the Dicer compound, the primary siRNA, the secondary siRNA, the secondary siRNA, the RRF-1, the multi-molecule, the 5', the end, the end, the end In addition, the worm, RNAi, RNAi, mRNA, RISC, cytopathic acid, bioactive, active, molecular, biological, biological, molecular, biological, molecular, molecular, biological, molecular, molecular, biological, biological, molecular, molecular, biological, molecular, biological, biological, molecular, biological, biological, molecular, molecular, biological, molecular, biological, biological, molecular, molecular, biological, biological, molecular, molecular The results of the cell extraction test of RNAi, the activity of RISC, the activity of Argonaute, the activity of DNA, the activity of DNA, the activity of DNA, In addition, the mRNA cleavage activity of secondary siRNAs was confirmed by CSR-1 assay.

项目成果

期刊论文数量(3)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
Biochemical genetic analyses of RdRP and Slicer activities related to RNAi in C. elegans
线虫中与 RNAi 相关的 RdRP 和 Slicer 活性的生化遗传分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Akoi;K.;Moriguchi;H.;Okawa;K.;& Tabara;H.
  • 通讯作者:
    H.
In vitro analyese of the production and activity of secondary small interfering RNAs in C. elegans
线虫次级小干扰 RNA 产生和活性的体外分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Aoki;K.;Moriguchi;H.;Yoshioka;T.;Okawa;K.;& Tabara;H.
  • 通讯作者:
    H.
C. elegans における二次型siRNAの産生と活性についての遺伝生化学的解析
线虫次级 siRNA 产生和活性的遗传和生化分析
  • DOI:
  • 发表时间:
    2007
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    田原浩昭;ほか
  • 通讯作者:
    ほか
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