2本鎖RNAによる遺伝子発現抑制機構の研究

双链RNA基因表达抑制机制研究

• 批准号: 01J01904
• 负责人: 田原 浩昭
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: National Institute of Genetics (2002)The University of Tokushima (2001)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2001
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2001 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01J01904/
• 关键词: RNAi; C. elegans; 抗体

RNAiとは、生物に2本鎖RNA (dsRNA)を投与した場合に相同な配列を持つmRNAの分解が生じる現象であり、基礎研究のための遺伝子発現抑制の新しい手法としてのみならず将来の医療分野への応用も期待されている。RNAi現象の分子機序の実体を解明するために、筆者はモデル生物として線虫C. elegansを用いて研究を行ってきている。筆者はこれまでに、dsRNAの導入に伴うRNAi反応に関与する因子を幾つか同定してきており、その因子の1つであるrde-1に着目して本年度の研究を行った。まずRDE-1のN末領域に対応するリコンビナント蛋白を作製し、ラットとウサギに対して免疫して抗体を作製した。次に、精製した抗RDE-1抗体を用いた免疫沈降実験によって、RDE-1がin vivoで相互作用している蛋白の候補を4種得た。質量分析による解析の結果、相互作用を示す蛋白の1つであるp40がII番染色体上の遺伝子に由来することがわかった。又、筆者は、RNAi反応に関与する因子を同定するためにRNAi活性を欠損した変異体rdeを単離してきた。これまでのスクリーニングにおいてはrde-1遺伝子に対する変異が多く出現し、その他のRNAi関与遺伝子に対する変異が得られる確率が低いことが問題点であった。そこで、新しいタイプのrde変異体を効率良く単離するために、rde-1遺伝子を多コピー導入したトランスジェニック線虫を作製することにより、rde-1変異体を避けて遺伝学的スクリーニングを行うシステムを開発した。

RNAi and RNA (dsRNA) are the same in both biological and genetic situations, and the same sequence of dsRNA is maintained in mRNA decomposition. Basic research and new methods to inhibit the development of dsRNA are expected to be used in future medical fields. The molecular mechanism of RNAi phenomenon is explained in detail. elegans used to study the relationship. This year's research is focused on the introduction of dsRNA and RNAi response factors. The N-terminal domain of RDE-1 controls the immune response. 4 kinds of protein candidates were obtained by using anti-RDE-1 antibody in vivo. Mass analysis results, interactions show protein 1, p40, and the origin of protein on chromosome II. In addition, the authors found that RNAi activity was significantly lower than that of other genes. The accuracy rate of this problem is very low. In addition, the RDE-1 gene has been introduced into the system to prevent the occurrence of genetic mutations.

项目成果

Hiroaki Tabara(=田原 浩昭): "The dsRNA binding protein RDE-4 interacts with RDE-1, DGR-1, and a DExH-Box helicase to direct RNAi in C. elegans"Cell. 109. 861-871 (2002)

Hiroaki Tabara（=Hiroaki Tahara）：“dsRNA 结合蛋白 RDE-4 与 RDE-1、DGR-1 和 DExH-Box 解旋酶相互作用，以指导线虫中的 RNAi”细胞。

田原 浩昭: "線虫のRNAiプロトコル(feeding法)"細胞工学. 22. 188-196 (2003)

Hiroaki Tahara：“线虫的 RNAi 方案（喂养方法）”Cell Engineering 22. 188-196 (2003)。

田原 浩昭: "RNAi:その生物学的意義とテクノロジー"蛋白質 核酸 酵素. 48. 469-479 (2003)

Hiroaki Tahara：“RNAi：其生物学意义和技术”蛋白质核酸酶48. 469-479 (2003)。