線虫をモデル生物としたRNAi反応機構の分子遺伝学的解析

以秀丽隐杆线虫为模式生物的RNAi反应机制的分子遗传学分析

• 批准号: 16770004
• 负责人: 田原 浩昭
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16770004/
• 关键词: RNAi; 線虫; C.elegans; 遺伝学

RNAi(RNA interference)とは真核生物の細胞に二本鎖RNAを導入した場合に相同配列を持つ遺伝子の発現抑制が生じる現象であり、線虫Celegansで最初に発見された。遺伝子発現を制御する新しい手段として、基礎研究のみならず将来の医療や植物育種等へのRNAiの応用が期待されている。我々の研究グループは線虫をモデル生物として用いてRNAiの分子機序の解明に取り組んでいる。RNAiをRNAの分解反応の流れとして捉える場合、in vitroの無細胞反応系でRNAiを再現して解析することが有効な研究手法として考えられる。そこで、線虫の細胞抽出液を用いてRNAiを再現する無細胞反応系の開発を行った。粗精製した細胞抽出液を用いる工夫によって、RNAi反応において上流で長い二本鎖RNAを小分子RNAに分解するDicer(RNaseIII)活性および下流で標的mRNAを破壊するRISC活性、それぞれを検出する実験系の開発に成功した。RNAiは線虫で最初に発見された現象であるが、線虫におけるRISCの実体は未だ不明であり解明が求められている。現在、RISCの生化学的精製を進めているところである。又、生化学的に同定されてくる分子については、対応する遺伝子の破壊変異体を単離して個体レベルで機能を検証することが望ましい。そこで、ゲノムにランダムに欠失変異を生じさせた線虫集団を凍結保存ライブラリー化して、PCRスクリーニングによって目的遺伝子に欠失を持つ変異体を単離するシステムを構築した。

RNAi(RNA interference) and eukaryotic cells in the case of the introduction of two-lock RNA, the same sequence, the maintenance of gene expression inhibition phenomenon, the first time in the line worm Celegans. New methods for gene discovery control, basic research, and future applications of RNAi in medicine and plant breeding are expected. Our research on RNAi molecular sequence elucidation of the molecular mechanism of RNAi has been carried out in the field of molecular biology. RNAi RNA decomposition and replication in vitro The development of cell-free reaction systems using RNAi in cell extracts from the two species of worms. The development of the system was successful when crude cell extracts were extracted with time, RNAi reaction, Dicer(RNase III) activity, and down-stream target mRNA. RNAi is the first to appear in the phenomenon, the line is not clear, RISC's reality is not clear. Now, RISC's biochemical refinement is progressing. In addition, the biochemical identity of the molecule is determined by the molecular structure of the molecule, and the molecular structure of the molecule. In this case, we need to construct a system of frozen, preserved, PCR, and isolated virus sets for the purpose of identifying the missing genes.