B/R4RGSによる受容体選択的Gi制御

B/R4RGS 的受体选择性 Gi 调节

• 批准号: 18057023
• 负责人: 齊藤 修
• 金额: $ 3.58万
• 依托单位: Nagahama Institute of Bio-Science and Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2006
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2006 至 2007
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-18057023/
• 关键词: G蛋白質; 受容体; RGS; 小脳; 足場蛋白質; プルキンエ細胞

三量体G蛋白質のGサイクルをチューニングするRGSの中で、特に我々が独自に同定したRGS8に注目して、G蛋白質以外の相互作用因子を探索し、生体内での機能発現機構、その調節機構、さらに特異性決定機構の分子基盤の解明を進めた。Two hybridスクリーニングによる探索の結果、明らかな3種の核蛋白質を含む12種のRGS8結合蛋白質を発見した。1.RGS8がそのN端配列のMPRRを介してprotein phosphatase1結合蛋白として同定されていた足場蛋白spinophilin (SPL)に結合すること、この相互作用により同一部位に結合していたM1ムスカリン受容体がRGS8からはずれること、しかしM1受容体・SPL・RGS8の新しい複合体が形成されることを発見した。しかも、電気生理解析の結果このSPLを含む複合体の方が高効率でG蛋白質シグナルを調節できることを見出した。さらに、受容体の細胞表面分布も複合体形成の結果、大きく変化する事が判明した。SPLは、RGS2及び16にも結合した。これまで報告されていたRGSの受容体の直接および間接認識の関係が初めて明らかになった。2.RGS8が微小管モーターKiflaに結合することが判明した。さらにRGS8上の結合部位は、受容体/SPL結合部以外である事が判明し、RGS8を介して特定の受容体が微小管モーター上を輸送されるというシステムの存在が考えられた。Kiflaは、RGS2にも結合した。3.RGS8が低分子G蛋白質活性化因子RGL3に結合することが判明した。RGS8上の結合部位は、N端1-5残基MAALLで、RGL3のRal活性化ドメインに結合することが判明した。4.組み換え蛋白質を調製して陽性クローンを詳しく解析した結果、RGS8が、さらに次の9種の蛋白質に結合性を持つ事が判明した。それらは、微小管モーターKiflb結合蛋白質(KBP)、poly (rC)結合蛋白質(polyC)、WWドメイン結合蛋白質7(WWBP7)、細胞骨格蛋白Septinll (Septll)、 Zinc Finger蛋白質1(ZF)、 Melanoma Antigen Family D1(MAGED1)、シナプス小胞蛋白RIM1、RNA合成酵素C端部脱リン酸化酵素サブユニット1、nuclear receptor coactivator6である。このうちRGS2にも結合するのは、KBP、polyC、WWBP7、MAGED1であった。また、KBP、Septll、ZWのRGS8上の結合部位は、RGL3結合部位と同じN端1-5残基であった。一方、MAGED1結合部位は、SPL結合部位と同じN端6-9残基MPRRであった。これらの蛋白質の相互作用ネットワークが働き、RGS8の作用調節、特異性決定、さらにシグナル系連結が行われていると考えられる。これ程大規模にRGS結合蛋白質群が判明して来たのは初めてで、内容の一部は米国EB2008シンポジウム「第3回RGS Colloquium」で発表した。

Three quantity body G protein の G サ イ ク ル を チ ュ ー ニ ン グ す る RGS の で, special に I 々 が に alone with fixed し た RGS8 に attention し て を exploration, G protein の interaction factors し, born in vivo で の function 発 institutions, そ の regulating mechanism, さ ら に specific molecular decision institutions の base plate の interpret を into め た. Two hybrid ス ク リ ー ニ ン グ に よ る explore の results, Ming ら か な three の を nuclear protein contains む 12 の RGS8 binding protein を 発 see し た. 1. The がそ <s:1> n-terminal of RGS8 is coordinated with the <s:1> MPRRを to mediate the <s:1> てprotein phosphatase1, bind to the と <s:1> てprotein て, and fix the されて た た た foot protein spinophilin (SPL) に す る こ と, こ の interaction に よ に combined with same part り し て い た M1 ム ス カ リ ン by let body が RGS8 か ら は ず れ る こ と, し か し M1 by let body, SPL, RGS8 の new し い complex が form さ れ る こ と を 発 see し た. し か も, electricity 気 physiological analytical results の こ の SPL を む complex の party が high working content で G protein シ グ ナ ル を adjust で き る こ と を shows し た. Youdaoplaceholder0, the results of the formation of the <s:1> complex distributed on the surface of the receptor <s:1> cells, the major さらに く changes する events が, and the determination of <s:1> た. SPL び, RGS2 and び16に び combined た. The <s:1> れまで report されて た た た the direct および indirect acquaintance of the RGS <s:1> recipient <e:1> is related to が initial めて and ら されて になった になった. 2.RGS8が microtubule モ <s:1> タ <s:1> Kiflaに combined with する とが とが determine the た. さ ら に RGS8 の on combining site は, let the body/SPL anastomoses outside で あ る matter が.at し, RGS8 を interface し て specific の tiny tube by the capacity of body が モ ー タ ー deliver を さ れ る と い う シ ス テ ム の is が exam え ら れ た. Kifla た, RGS2に に combined with た. 3.RGS8が low-molecular-weight G protein activator RGL3に binds to する とが とが to determine た. RGS8 は の combining parts, n-terminal 1-5 residues MAALL で, RGL3 の Ral activeness ド メ イ ン に combining す る こ と が.at し た. 4. Group み in え protein を modulation し て positive ク ロ ー ン を detailed し く parsing し た results, RGS8 が, さ ら の に times nine の protein に associativity を hold つ matter が.at し た. Youdaoplaceholder0 それら, microtubule モ タ タ タ kiflb-binding protein (KBP), poly (rC) -binding protein (polyC), WWドメ ドメ <s:1> binding protein 7(WWBP7), cytoskeletal protein Septinll (Septll), Zinc Finger protein 1(ZF) Melanoma Antigen Family D1(MAGED1), シナプス cytoprotein RIM1, RNA synthesis enzyme c-terminal demineralization リ <s:1> acidification enzyme サブユニット1, nuclear receptor coactivator6である. <s:1> うちRGS2に であった in combination with する であった, KBP, polyC, WWBP7, MAGED1であった. Youdaoplaceholder0, KBP, Septll, ZW <s:1> RGS8 <s:1> binding site, RGL3 と and じ n-terminal 1-5 residues であった. One side, the MAGED1 binding site と, the SPL binding site と, and the 6-9 residue MPRR at the N terminal of じ であった. の こ れ ら の protein interaction ネ ッ ト ワ ー ク が 働 き, RGS8 の function regulation, specific decision, さ ら に シ グ ナ ル system connecting line が わ れ て い る と exam え ら れ る. こ れ cheng large-scale に RGS binding protein group が.at し て to た の は early め て で, content の a は U.S. EB2008 シ ン ポ ジ ウ ム "3 back to RGS Colloquium" で 発 table し た.

项目成果

The receptor type-specific attenuation of G protein signaling by RGS8

RGS8 对 G 蛋白信号传导的受体类型特异性减弱

• 发表时间: 2008
• 作者: Saitoh;O.
• 通讯作者: O.

Alternative splicing of RGS8 gene changes the binding property to the M1 muscarinic receptor to confer receptor type-specific Gq regulation.

RGS8 基因的选择性剪接改变了与 M1 毒蕈碱受体的结合特性，从而赋予受体类型特异性 Gq 调节。

• 发表时间: 2006
• 期刊: J. Neurochem 99
• 作者: Itoh;M.;Nagatomo;K.;Kubo;Y.;Saitoh;O.
• 通讯作者: O.

Spinophilin inhibits the direct binding of RGS8 to the ml muscarinic receptor but enhances the regulatory function of RGS8 on the ml receptor-mediated signaling.

Spinophilin 抑制 RGS8 与 ml 毒蕈碱受体的直接结合，但增强 RGS8 对 ml 受体介导的信号传导的调节功能。

• 发表时间: 2007
• 作者: Fujii S.;Kubo;Y. and Saitoh;O.
• 通讯作者: O.

Interaction of RGS8 with the kinesin motor protein KIF1A.

RGS8 与驱动蛋白运动蛋白 KIF1A 的相互作用。

• 发表时间: 2007
• 作者: Saitoh;O.;Fujii;S.
• 通讯作者: S.

Interaction of RGS8 with the Ra1GDS family protein RGL3.

RGS8 与 Ra1GDS 家族蛋白 RGL3 的相互作用。

• 发表时间: 2007
• 作者: Kiyohara;K.;Mura;K. and Saitoh;O.
• 通讯作者: O.