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テーパー状流路を用いた単一細胞からの瞬間RNA抽出と解析研究

使用锥形通道从单细胞中即时提取 RNA 并进行分析研究

基本信息

批准号：
19021018
负责人：
高村禅
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Japan Advanced Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2007
资助国家：
日本
起止时间：
2007 至 2008
项目状态：
已结题

项目摘要

本年度得られた成果を列挙する。1. RNA抽出条件の精査と品質の確認これまでの研究で開発した変性剤を用いたトラップ抽出法でも、PCR可能なことが確認されたが、本年度はさらに品質を上げるため、変性剤を用いない方法の開発を試みた。その結果、一旦70℃以上にサンプルを過熱し、一旦熱変性させ、その後常温で速やかにトラップすることで、十分なトラップが可能な条件が見つかった。本法は、変性剤を用いないため、後処理に対する影響が少なく、より適しているとがえれる。2. 単一細胞よりRNAを瞬間抽出し、解析部に確実に渡すためのチップ開発本年度は、特定の検出方法に特化した、チップの設計・最適化を行う。現在、パフォーマンス上のボトルネックとして、単一細胞をチップ内に導入する工程である。したがってここを改善するため、複数の細胞をが含まれている液より、単一細胞を自動的にピックアップし、それぞれの解析流路に一つずつ導入する、微小流体デバイスを開発した。これは、本法以外にも、単一細胞の解析、特に再生医療等での利用が期待されている。3. RNA解析方法の開発3-1 チップ内集積化可能な簡易解析方法の開発昨年度開発したチップ上にミネラルオイルを保持する方法をさらに発展させ、ミネラルオイルを用いない方法の開発に取り組む。具体的には、チップ内部の、水上気圧を制御し、かつガスを投下しにくい膜をチップ内にコーティングする手法を検討する。ミネラルオイルを用いずとも、蒸発が抑えられることを確認した。3-2 チップ外の装置を組み合わせたより高度な解析法の開発チップ内で抽出したRNAをゲル内に保持し、外へ取り出す手法により、定量的な評価を行った。

The results of this year will be listed in the list of achievements. 1. The RNA extraction conditions confirm that the pilot study begins with the withdrawal method, the PCR may use the extraction method, and the current health test is available for this year, and the test is conducted using the test method. The results show that once the temperature is above 70 ℃, once the temperature is over 70 ℃, once the temperature is over 70 ℃. In this law, sex is used in the first place, and after the treatment is done, it is necessary to make sure that there is a lack of information. two。 As soon as the RNA is pulled out in an instant, the analysis department makes sure that it will start this year, that the specific output method will be customized, and that the customization of the design will be the most appropriate. Now, please tell me that you are going to enter the project. In order to improve the performance of the system, the complex cell contains the concentration of the liquid, the automatic transmission of the cell, the analysis of the flow path, and the microfluidics. In addition to this law, the analysis of one cell, special regenerative medicine, and so on, are expected to be used. 3. RNA parsing methods open 3-1 the internal set of possible easy to analyze methods start last year to maintain the availability of data storage methods to improve the performance of the system, and to use the improved method to open the data acquisition system. The specific equipment, the interior, the control and control of the water, the membrane, the inside, the control, the control and the control. Please make sure that you are sure that you do not want to know if you want to make sure that you do not know what to do. 3-2 the external device is used to determine the height of the device. The method of analysis is to extract the RNA from the inside, to maintain the internal pressure, to obtain the export method, and to quantify the quantity of the device.