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テーパー状流路を用いた単一細胞からの瞬間RNA抽出研究

使用锥形通道从单细胞中进行即时 RNA 提取研究

基本信息

批准号：
18038019
负责人：
高村禅
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Japan Advanced Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2006
资助国家：
日本
起止时间：
2006 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、幅数ミクロンのテーパー状流路に、圧力と電圧を同時に印加して生体物質を流すと、DNA等長鎖状の分子を選択的にトラップ・抽出・濃縮できる技術を用い、1細胞からmRNAを抽出・精製するチップの開発を目的とする。本年度の成果を列挙する。1.RNA抽出条件の精査RNAはDNAと違い、まずsingle strandであり、自己会合しやすく、また鎖長も様々であるため、DNAトラップのノウハウがそのまま利用できないと考えられる。そこで、本課題では、まず、RNAを選択的にトラップできる条件を探る。具体的には、流路大きさ、圧力、電圧、ランニングバッファー、変性剤の有無、mRNA標識剤の有無などを調べた。その結果、なによりもランニングバッファーの影響が大きいことが分かり、この組成、調整方法を精査した。最終的には、マイルドに変性させる条件下で、効率よく、RNAをトラップできるランニングバッファーが得られ、特許化を行った。これにより、20〜100塩基程度のRNAがトラップできた。これはDNAトラップをもしのぐ成果であり、近年注目されているRNA干渉などの実験への応用も十分期待できるレベルである。2.単一細胞よりRNAを抽出するチップの設計検討実際に1細胞のRNAを瞬間的に抽出可能な、次に挙げる部位より構成されるチップの作製を目指し、本年度は詳細の検討、及び抽出部の試作を行う。2-1 1細胞供給部位一細胞を抽出部位に供給する 2-2 細胞破砕部流路を通る一つの細胞に、適確な濃度の細胞破砕液を作用させ、細胞を破砕すると同時に酵素を破壊する。2-3 RNAトラップ＆捕集部テーパー状流路を用いて、RNAのみを選択的に捕集し、別流路に精製・分岐する。以上の各ステップを別々にチップ化し、具体的に検討をおこなった。その結果、ほぼ当初の予定通りの成果を得ることができた。

This study aims to develop technologies for the extraction and purification of DNA and other long-chain molecules by simultaneous application of pressure and voltage in the flow of biological substances and in the extraction and purification of mRNA in cells. The results for the year are listed below. 1. RNA extraction conditions for RNA extraction: DNA, DNA This paper discusses the conditions for RNA selection. Specific parameters, such as flow path, pressure, voltage, temperature, presence or absence of a variable, presence or absence of an mRNA marker, are adjusted. The results of the study, the composition of the study, and the adjustment methods were carefully examined. In the final analysis, the efficiency of RNA is determined by the characteristics of RNA. The RNA of 20 ~ 100 base level is classified into three groups: The results of DNA sequencing are expected in recent years. 2. The design of RNA extraction from single cell is discussed in detail this year, and the trial of RNA extraction from single cell is carried out. 2-1 1. Cell supply site 1. Cell extraction site 2. Cell disruption site Flow path 1. Cell disruption solution with appropriate concentration 2. Cell disruption 3. Enzyme disruption 2-3 RNA capture and purification in different flow paths The above items are classified into three categories: The result of the test is that the test results are obtained from the test results.