細胞核イノシトールリン脂質シグナル系の調節機構と細胞制御

核肌醇磷脂信号系统的调控机制及细胞控制

• 批准号: 19038020
• 负责人: 八木澤 仁
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: University of Hyogo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2007
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2007 至 2008
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-19038020/
• 关键词: 酵素; 細胞・組織; 脂質シグナル伝達; 細胞周期; ホスホリパーゼC; 細胞ストレス応答; 細胞核; Ca^<2+>

核には細胞膜や細胞質とは異なったイノシトールリン脂質(PI)シグナル系が存在する。特にホスファチジルイノシトール二リン酸(PIP_2)の核内における分布と量的変化は、細胞分裂、分化、細胞死などの諸現象と密接に関係していると考えられている。我々はPIP_2の分解酵素であるホスホリパーゼC(PLC)δ_1が細胞質と核内との間を行き来することを報告してきたが、本研究では、核内に蓄積するためのシグナルについて検討した。種々の培養細胞を使用して、GFP-PLCδ_1および内在性PLCδ_1の細胞内分布の解析を行った。PLCδ_1は無刺激状態では細胞膜と細胞質に分布するが、Ca^<2+>イオノホアなど細胞内Ca^<2+>濃度の急激な上昇を伴う薬剤処理により、核内に移行した。この際、PLCδ_1はインポーチンαに結合することなく直接インポーチンβ1と結合し、この複合体形成と核内移行にはPLCδ_1の活性中心へのCa^<2+>結合が必要であった。さらにラット海馬由来神経初代培養細胞を用いた実験系で、上記薬剤処理による急激なCa^<2+>濃度上昇や高グルタミン酸添加による虚血性神経細胞死誘導にともなってPLCδ_1の核内移行が観察された。また、これらのストレス誘導細胞死の前段階である核収縮にPLCδ_1活性が関与することが明らかとなった。さらにPLCδ_1遺伝子ノックアウトマウスの胎性線維芽細胞を用いて、PLCδ_1遺伝子再導入による細胞増殖に対する影響を調べたところ、対照細胞であるGFPのみを発現させた細胞と比較して、GFP-PLCδ_1あるいは核標的化GFP-PLCδ_1を発現させた細胞で増殖が抑制されることが判明した。これらの結果は、これまでに報告されている細胞株におけるPLCδ_1遺伝子ノックダウン実験の結果とは異なり、PLCδ_1の核移行が増殖抑制あるいは細胞死の前段階として働く場合があることを示唆している。

Nuclear に は membrane や cytoplasm と は different な っ た イ ノ シ ト ー ル リ ン lipid (PI) シ グ ナ ル department が exist す る. Special に ホ ス フ ァ チ ジ ル イ ノ シ ト ー ル two リ ン acid (PIP_2) の nuclear に お け る distribution - the amount of と は, cell division and differentiation, cell death な ど の various phenomena と contact に masato is し て い る と exam え ら れ て い る. I 々 は PIP_2 の decomposition enzyme で あ る ホ ス ホ リ パ ー ゼ C (PLC) delta _1 が cytoplasm と intranuclear と の き を line between す る こ と を report し て き た が, this study で は, nuclear accumulation of に in す る た め の シ グ ナ ル に つ い て beg し 検 た. The 々 <s:1> cultured cells を were analyzed using the <s:1> て, GFP-PLCδ_1および, and the intracellular distribution of PLCδ_1 <s:1>. The を row った was also analyzed. PLC delta _1 は no stimulation state で す は membranes と cytoplasm に distribution る が, Ca ^ 2 + > < イ オ ノ ホ ア な ど intracellular Ca ^ > < 2 + concentration rising の nasty shock な を with う 薬 tonic 処 Richard に よ り, nuclear に transitional し た. こ の international PLC, the delta _1 は イ ン ポ ー チ ン alpha に combining す る こ と な く directly イ ン ポ ー チ ン beta 1 と し, こ の complex formation と nuclear internal migration に は PLC delta _1 の active center へ の Ca ^ 2 + > < combining が necessary で あ っ た. さ ら に ラ ッ ト hippocampus by return 経 original culture cell を with い た be 験 で, written 薬 tonic 処 Richard に よ る nasty shock な Ca ^ 2 + < > high concentration rises や グ ル タ ミ ン acid added に よ る virtual hemorrhagic god 経 induced cell death に と も な っ て PLC delta _1 の nuclear internal migration が 観 examine さ れ た. ま た, こ れ ら の ス ト レ ス induced cell death front order で の あ る nuclear 収 shrinkage に PLC delta _1 active が masato and す る こ と が Ming ら か と な っ た. さ ら に PLC delta _1 heritage 伝 son ノ ッ ク ア ウ ト マ ウ ス の fetal line d を bud cells with い て, PLC delta _1 heritage 伝 son to import に よ る cells raised colonization に す seaborne る influence を adjustable べ た と こ ろ, polices according to cell で あ る GFP の み を 発 now さ せ た cells と compare し て, GFP - PLC delta _1 あ る い は nuclear target GFP - PLC delta _ 1を occurrence of させた cell で proliferation が inhibition される とが とが identification of た. こ れ ら の results は, こ れ ま で に report さ れ て い る cell lines に お け る PLC delta _1 heritage 伝 son ノ ッ ク ダ ウ ン be 験 の results と は different な り, PLC delta _1 の nuclear migration が raised colonization inhibit あ る い は の cell death in order と し て 働 く occasions が あ る こ と を in stopping し て い る.

项目成果

START-GAP 1,a PLCdeltal-binding RhoGAP,in focal adhesions regulates cell morphology and motility

START-GAP 1，一种 PLCdeltal 结合 RhoGAP，在粘着斑中调节细胞形态和运动

• 发表时间: 2007
• 作者: Yagisawa H;et. al.
• 通讯作者: et. al.

脂質二重膜表面の曲率とホスホリパーゼC-δ1 PH ドメインの立体構造変化 : 固体NMR分光法による解析

脂质双层表面的曲率和磷脂酶 C-δ1 PH 结构域的构象变化：固态 NMR 光谱分析

• 发表时间: 2007
• 作者: 上釜奈緒子;青木隆広;丸岡俊宏;栗栖聖治;畠山明子;岡田雅司;八木澤仁;西村勝之;辻暁
• 通讯作者: 辻暁

Regulation of intercellular lacalization of a dual functional PLCδ1-bindingprotein,pl22 RhoGAP/DLCl,a member of the tumor-suppressing START-GAP Family proteins

双功能 PLCδ1 结合蛋白 pl22 RhoGAP/DLC1（肿瘤抑制 START-GAP 家族蛋白的成员）的细胞间定位的调节

• 发表时间: 2007
• 作者: Yagisawa H;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Recruitment and activation of phospholipase C (PLC)-δ_1 in lipid rafts bymuscarinic stimulation of PC12 cells:contribution of pl22RhoGAP/DLC1,a tumor-suppressmg PLCδ-1 binding protein

PC12细胞毒蕈碱刺激脂筏中磷脂酶C（PLC）-δ_1的募集和激活：抑癌PLCδ-1结合蛋白pl22RhoGAP/DLC1的贡献

• 发表时间: 2008
• 期刊: Adv.Enzyme Regulation 48(印刷中)
• 作者: Yamaga M;et. al.
• 通讯作者: et. al.

Measurement of inositol polyphosphates by ion chromatography and their physiological status in higher plants

离子色谱法测定高等植物中肌醇多磷酸及其生理状态

• 发表时间: 2008
• 作者: Mimura;T.;Mitsuhashi;N.;Richardso;A.;Chung;S-K. and Yagisawa;H.
• 通讯作者: H.