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cDNAマイクロアレイ解析を用いた新規癌特異抗原の探索と臨床応用

利用 cDNA 微阵列分析和临床应用寻找新型癌症特异性抗原

基本信息

批准号：
20014020
负责人：
平田真哉
金额：
$ 3.84万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

非小細胞肺癌のcDNAマイクロアレイ解析により、正常肺組織と比較して非小細胞肺癌に高発現する新規癌精巣抗原である、CDCA1(cell division cycle associated 1 gene)を同定した。CDCA1は、小細胞肺癌、胆管癌、膀胱癌および腎臓癌にも高発現していた。CDCA1のアミノ酸配列を、BIMAS解析ソフトウエアを用いて解析し、HLA-A2(A*0201)に結合する構造モチーフを有する40種類のペプチドを選んだ。これらのペプチドを合成して数種類ずつ混合し、あらかじめHLA-A2(HHD)トランスジェニックマウス(HLA-A2 Tgm)の骨髄細胞より誘導した樹状細胞(DC)にパルスした後に腹腔内に免疫し、これを1週間おきに2回行った。その後、脾細胞を採取しin vitr。で一週間培養し、IFNγELISPOT法でペプチド特異的細胞傷害性T細胞(GTL)の免疫応答を観察し、HLA-A2拘束性を示す2種類の細胞傷害性T細胞(CTL)のエピトープ候補を決定した。なお、これらのマウスでは、自己免疫病の発症を示唆する異常は認めなかった。これらのペプチドを、健常人ならびに肺癌患者の末梢血単核細胞(PBMC)から分離したCD8陰性細胞から誘導した樹状細胞にパルスして、CD8陽性細胞を3回刺激してCTLを誘導し、IFNγELISPOT法とCr放出試験で抗原特異的CTL応答を評価した。これら2種類のペプチドは、健常人および肺癌患者由来のPBMCから、ヒトCDCA1に特異的なHLA-A2拘束性CTLを誘導できた。これらのCTLは、CDGA1とHLA-A2を同時に発現する癌細胞株に対して、抗原特異的な細胞傷害活性を示した。以上より、CDCA1は非小細胞肺癌、小細胞肺癌、胆管癌、膀胱癌および腎臓癌を対象とした免疫療法に応用が可能な、癌特異抗原であると考えられる。

cDNA analysis of NSCLC and CDCA1 (cell division cycle associated 1 gene) were compared with normal lung tissue. CDCA1 is highly expressed in small cell lung cancer, cholangiocarcinoma, bladder cancer, and renal cancer. CDCA1 has a different acid sequence, BIMAS analysis software, HLA-A2(A*0201) binding structure, and there are 40 different types of selection options. The number of different kinds of cells mixed, mixed and induced by HLA-A2(HHD) TgM cells in the abdominal cavity was increased by 1 week. Splenocytes are taken in vitr. During the culture period, IFNγELISPOT method was used to select specific cytotoxic T cells (CTLs) for immune response detection and HLA-A2 binding. Two types of cytotoxic T cells (CTLs) were selected for selection. It is not easy to understand the symptoms of immune diseases. CD8-negative cells were isolated, dendritic cells were induced, CD8-positive cells were stimulated, CTL was induced, IFNγELISPOT assay and antigen-specific CTL response was evaluated. These two types of CDCA1-specific HLA-A2-binding CTLs were induced by PBMC from lung cancer patients, healthy individuals, and non-healthy individuals. The CTL, CDGA1, and HLA-A2 are simultaneously expressed in cancer cell lines, and antigen-specific cellular injury activity is demonstrated. CDCA1 may be used in immunotherapy for NSCLC, SCLC, BCC, and renal cancer.