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有効な腫瘍マーカーのない婦人科悪性腫瘍に対する新しい腫瘍マーカーの確立

针对尚无有效肿瘤标志物的妇科恶性肿瘤建立新的肿瘤标志物

基本信息

批准号：
20014024
负责人：
津田浩史
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

项目摘要

【目的】我々が新しく発見した蛋白につき、卵巣癌および子宮体癌に対して腫瘍マーカーとしての有効性を検証し、血中での測定システムを確立する。【方法】(1)臨床検体での解析:対象:婦人科悪性腫瘍604例(卵巣癌254例、体癌163例、頸癌187例)。作製したポリクローナル抗体でHIG2蛋白の発現を検証した』(2)HIG2モノクローナル抗体の作製とHIG2-ELISA系の開発:HIG2全長(63アミノ酸)のリコンビナント蛋白質を大腸菌His融合発現系にて発現し、HPLC-His-Trapによりアフィニティ精製を行った。さらに上述の精製を繰り返し、銀染色にて大腸菌夾雑蛋白質の完全な除去を確認した。この高純度HIG2リコンビナント蛋白質を抗原としてマウスモノクローナル抗体(mAb)およびウサギポリクローナル抗体(pAb)を作製した。【成績】(1)卵巣癌、体癌、頸癌でのHIG2蛋白発現率は80%、71%、65%であり、特に有効な腫瘍マーカーのない卵巣明細胞腺癌、子宮体部腺癌および頸部腺癌それぞれ83%、75%、67%と高発現していた。(2)作製したmAbおよびpAbの特異性を検証したが、これまでHIG2高発現の報告のある腎細胞癌培養細胞株で、両抗体は特異的に免疫沈降が可能で、さらに淡明腎細胞癌組織を特異的に強く染色した。次に、両抗体でサンドウィッチELISA法によるHIG2蛋白質検出系の樹立を行い、75ng/mLのHIG2リコンビナント蛋白質の検出に成功した。しかし、腎細胞癌患者の血漿では検出できなかった。【結論】HIG2蛋白は卵巣癌、体癌および頸癌で有効な腫瘍マーカーになりうる可能性が示唆された。現在、作製した両抗体を用いて、血漿中HIG2を免疫沈降後の質量分析による検出系の開発を試みている。

【 objective 】 I 々が new しく発 see した protein につき, egg 巣 carcinoma および uterine body carcinoma にし seaborne て swollen sores マーカーとしての have sharper sex を検し, blood での determination システムを establish する. 【 Method 】(1) Clinical 検 body で pain analysis: Counterpart: 604 cases of 悪 abscess in gynecology (254 cases of ovarian cancer, 163 cases of body cancer, 187 cases of neck cancer). Cropping したポリクローナル antibody で HIG2 protein の発 now を検 card した "(2) HIG2 モノクローナル antibody の cropping と HIG2 - ELISA の open 発 : HIG2 length (63 アミノ acid) のリコンビナント protein を coliform 発 ihs fusion system now にて発し, HPLC - His - the Trap Youdaoplaceholder0 によアフィニティ refined を lines った. Youdaoplaceholder0 The above <s:1> refined を was coached and returned to <s:1>, and the silver staining of にて escherichia coli was used to remove the 雑 protein <e:1> completely な. Youdaoplaceholder5 confirmed that たた. この high-purity HIG2 リコンビナントを antigen protein としてマウスモノクローナル antibody (mAb) およびウサギポリクローナル antibodies (pAb) を cropping した. . 【 results 】 (1) egg 巣 cancer, cancer, cervical cancer での HIG2 protein は発 now rate 80%, 71%, 65% であり, に have sharper な swollen sores マーカーのない eggs 巣 clear cell adenocarcinoma, adenocarcinoma of the uterus body および cervical adenocarcinoma それぞれ 83%, 75%, 67% high と発 now していた. (2) a system of した mAb および pAb の specificity を検 card したが, これまで HIG2 high 発の is の report ある renal cell carcinoma cell lines で, struck the antibody は specific に immunity may sink がで, さらに pale clear renal cell carcinoma tissue を strong specific にく dyeing した. Time に, struck antibody でサンドウィッチ ELISA method によるの HIG2 proteins 検 the department set up をい, 75 ng/mL の HIG2 リコンビナント protein の検に successful した. Youdaoplaceholder0 で検検 from patients with renal cell carcinoma, ででなったったったった. 【 Conclusion 】 The possibility of HIG2 protein being effective in ovarian cancer, body cancer, および neck cancer, で abscesses, <s:1> カになになうるうるが is が suggesting された. Now, the production of た two antibodies を was carried out using <s:1> て. After immunodegradation of HIG2を in plasma, the mass of the sample was analyzed による検 to obtain the result. Then, a を test was developed and みてるるるる.