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染色体構築因子コンデンシンの細胞周期特異的活性の探索・解析

染色体组装因子凝缩蛋白细胞周期特异性活性的搜索与分析

基本信息

批准号：
20058041
负责人：
木下和久
金额：
$ 3.84万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2008
资助国家：
日本
起止时间：
2008 至 2009
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20058041/
关键词：
細胞周期染色体クロマチン細胞分裂リン酸化スピンドル

项目摘要

真核生物の遺伝情報を担うゲノムDNAは、細胞周期M期において凝縮した一対の姉妹染色体としてスピンドルのはたらきによって子孫細胞に分配される。正確な遺伝情報の継承のプロセスにはゲノムDNAの可逆的な構築変化が不可欠であり、この染色体構築の過程において中心的な役割を果たすのがコンデンシンと呼ばれる五つのサブユニットからなる巨大な分子複合体である。染色体構築のメカニズムの解明には、その中心的プレーヤーであるコンデンシンがどのような分子活性を持って機能しているのか理解することが重要であるが、その分子機能についてはまだ不明な点が多い。特定の分子の生化学的活性の解析には通常組換え体を用いたin vitroにおける再構成実験系が有効である。組換え体からなるコンデンシン複合体についてもこれまで既に試みはなされているものの巨大な複合体ゆえに発現が容易でなく、in vitroの生化学的解析に用いるのに十分な複合体はまだ得られていなかった。そこで本研究では、バキュロウイルスの昆虫細胞発現系を用いて組換え体サブユニットからなる活性型コンデンシン複合体の再構成を試みた。新たに作製した発現コンストラクトにいくつかの改良を加え条件検討した結果、五種類のサブユニットを同時に効率よく発現できる発現系の構築に成功した。現在まだ部分精製の段階ではあるものの、この発現系によって組換え体コンデンシンの二種類のポロ複合体コンデンシンIとコンデンシンII、あるいは二つのSMCサブユニットからなるコアニ量体についてin vitroでの詳細な解析の実現が可能になった。さらに組換え体に変異を導入することにより、これまで解析困難であったコンデンシンのATPase活性の役割の解明等につながることが期待され、染色体構築の分子メカニズムの理解を大きく前進させるであろう。

Eukaryotic genetic information is required for DNA condensation, cell cycle M phase condensation, and chromosome distribution. The correct information is required for the transformation of reversible DNA construction. The process of chromosome construction is essential for the transformation of central DNA into large molecular complexes. Chromosome architecture and molecular function are important for understanding the molecular activity and function of chromosomes. The analysis of biochemical activity of specific molecules is usually carried out in vitro. It is easy to find the complex in vitro and biochemical analysis, and the complex is easy to find. In this study, we tried to reconstruct the active protein complex of insect cells by using the recombinant protein system. The new system was successfully constructed by adding conditions to the results of the study, and the five types of system were successfully constructed. Now, we have refined some of the stages, such as the formation of two kinds of complex compounds, such as the composition of the complex I and the complex II, and the detailed analysis of the complex in vitro. The molecular structure of chromosomes is difficult to understand, and the molecular structure of chromosomes is difficult to understand