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転写因子S-IIの生物学的機能及び, その遺伝子構造の解析

转录因子S-II的生物学功能及其遗传结构分析

基本信息

批准号：
62620506
负责人：
名取俊二
金额：
$ 1.41万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

転写因子S-IIは, 当初RNAポリメラーゼIIの活性促進蛋白として, マウスエールリッヒ腹水がん細胞から単離された蛋白である. S-IIに対する抗体が単離核におけるRNA合成を阻害すること, また, いわゆるManleyの系の中で, run-off産物の産生を特異的に阻害することから, S′-IIは真核生物の転写因子の一つと考えられるに至っている. 本研究では, このS′-IIのCDNAの単離を行い. その遺伝子の発現パターンを解析したものである. まずcDNAのクローニングについては, 常法に従って, 精製した蛋白の部分的なアミノ酸配列を決定し, それに対応するDNAプローブを準備した. 次に, このDNAプローブを用いて, エールリッヒ腹水がん細胞のCDNAライブラリーをスクリーニングした. その結果, 陽性のクローンをいくつか得たが, 最終的にはPSII-1, pSII-2, pSII-3と命名した三種のクローンを単離した. 塩基配列の分析の結果, pSII-1と3は同一のクローンに由来することがわかった. 一方, pSII-2はこれらの二つのクローンとは異なり, 5′上流部分に78塩基の特異的な配列が存在した. この配列の中にもMetのコドンがあるが, すぐに終止コドンが現れ, その後の配列は三種のクローンで共通であった. 一方, PsII-1および3では, pSII-2の78塩基に相当する部分の中にMetのコドンが一ヶ所あり, これが翻訳開始部位と考えられた. 試験管内での転写-翻訳系を用いて解析した結果, このMetから翻訳が始まれば, 蛋白の分子サイズ, アミノ酸組成ともにS′-IIのそれと一致することがわかった. この結果は, pSII-3がS-IIのCDAであることを示している. 次にpSII-3をプローブとしたノーザン解析の結果, エールリッヒ腹水がん細胞は, サイズの異なる四種類のS-IImRNAを含むことが明らかとなった. この事実は, S-IImRNAには多様生があることを示すが, 各々のmRNAのコードする蛋白の研究はこれから問題である.

Factor S-II is an activity-promoting protein that promotes the activity of RNA molecules. S-II antibodies specifically inhibit RNA synthesis in isolated nuclei and the production of run-off products in Manley's system. In this study, S′-II cDNA fragments were isolated. The analysis of the discovery of the virus. The DNA sequence of the purified protein is determined by the method of DNA sequencing. Next, the DNA of the cell is extracted from the DNA of the cell. As a result, the positive and negative results were obtained, and the final results were PSII-1, pSII-2, pSII-3. According to the results of base alignment analysis, pSII-1 and pSII-3 are the same. On the other hand, pSII-2 has a special arrangement of 78 bases in the upper part of 5′. This arrangement is common to all three types. PsII-1 and PsII-2 have the same base as PsII-1 and PsII-2. The results of the analysis of the system in the test tube show that the protein molecule is composed of S ′-II and the protein molecule is composed of S′-II. The result is that pSII-3 S-II CDA. The analysis results of pSII-3 mRNA showed that there were four kinds of S-II mRNA in the ascites, including pSII-3 mRNA and pSII-3 mRNA. The study of S-II mRNA is a problem.