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枯草菌と大腸菌におけるトランス・トランスレーションの標的タンパク質の解析

枯草芽孢杆菌和大肠杆菌中反式翻译靶蛋白的分析

基本信息

批准号：
15013201
负责人：
姫野俵太
金额：
$ 4.22万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013201/
关键词：
tmRNA トランストランスレーション TreP カタボライト抑制 CcpA Cre配列 PerR MetE

项目摘要

トランストランスレーションは、翻訳が中断したmRNAからtmRNAへとリボソームが翻訳を切替えることで二つの分断された情報から一本のキメラペプチドを作り出す、変則的翻訳である。本研究ではまず、トランストランスレーション産物を特異的に検出、単離するシステムを開発した。この方法を用いてまず、枯草菌のtmRNAが仲介するトランストランスレーションの標的タンパク質が通常の温度(37℃)と高温(50℃)では大きく異なること、また全体として高温のときほど、トランストランスレーションが盛んに起こっていることを明らかにした。次にN末端アミノ酸配列分析により、それぞれの温度における標的タンパク質のうちのいくつかを同定した。それらの中にはストレス応答遺伝子産物(PerR)、カタボライト抑制を受ける遺伝子産物(TreP)など興味深いものが含まれていた。TrePのトランストランスレーション産物は、プロテアーゼで消化した後、MALDI TOF MASを用いてアミノ酸配列を解析し、TrePからタグペプチドへの切り替え位置を調べた。その結果、切り替えはTrePの内部に存在するCre配列(カタボライト抑制に関わるリプレッサータンパク質CcpAの認識配列)のすぐ上流から起こっていることが明らかになった。CcpAの欠損株を作成したところ、そこではTrePのトランストランスレーション産物も消失していた。CcpA欠損株においては、TreP以外のトランストランスレーション産物の多くが消失していた。以上のように、トランストランスレーション反応がCcpAを介したカタボライト抑制全般に関与する可能性が示唆された。一方、大腸菌のトランストランスレーションの標的タンパク質ついてもそのいくつかを明らかにすることができた。その中で、現在MetEについてトランストランスレーション反応産物の詳しい解析を行っているところである。

Truffles It is a translation of えることで二つの分されたInformationから一本のキメラペプチドを为り出す、変Nor. In this study, the specific に検出, single separation するシステムを开発した of the ではまず, トランストランスレーション product. The method is using いてまず, subtilis tmRNA が mediated by するトランストラThe standard quality of ンスレーションのタンパク is the normal temperature (37℃) and high temperature (5 0℃)では大きくdifferentなること、また全としてHigh temperatureのときほど、トランストランスレーションが生んに出こっていることを明らかにした. The N-terminal amino acid arrangement analysis is done, and the temperature of the それぞれのtemperature is determined.それらの中にはストレス応 Answer 伝子 Product (PerR), カタボライト suppress The product (TreP) produced by the manufacturer is a product with a deep taste and a deep taste. TrePのトランストランスレーションproductは,プロテアーゼで digestionした, MALDI TOF MAS uses いてアミノacid coordination and analysis, and TreP uses からタグペプチドへのcut and replaces the position of を Adjustment.そのRESULTS, CUTTING えはTrePのINSIDE するCre SETレッサータンパクqualityCcpAのcognition arrangement)のすぐ上流から出こっていることが明らかになった. CcpA's defective strain is made, and TreP's depleted product is lost. CcpA lacks the ability to destroy strains and other products other than TreP, such as T-shirts. The above のように、トランストランスレーションanti応がCcpAをIntroducing the したカタボライト suppressing the general に口 and するpossibility がshows the instigation された. On the one hand, coliform bacteria are the standard of the bacteriaク性ついてもそのいくつかを明らかにすることができた.その中で、Now MetEについてトランストランスレーションreaction productの detailしいanalyticを行っているところである.