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枯草菌と大腸菌におけるトランス・トランスレーションの標的タンパク質の解析

枯草芽孢杆菌和大肠杆菌中反式翻译靶蛋白的分析

基本信息

批准号：
16013201
负责人：
姫野俵太
金额：
$ 3.71万
依托单位：
Hirosaki University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16013201/
关键词：
トランストランスレーション tmRNA TreP CcpA Cre配列 PerR MetE YfiA

项目摘要

トランストランスレーションは、翻訳が中断したmRNAからtmRNAへとリボソームが翻訳を切替えることで二つの分断された情報から一本のキメラペプチドを作り出す、変則的翻訳である。本研究ではまず、トランストランスレーション産物を特異的に検出、単離するシステムを開発した。この方法を用いてまず、枯草菌のtmRNAが仲介するトランストランスレーションの標的タンパク質が通常の温度(37℃)と高温(50℃)では大きく異なること、また全体として高温のときほど、トランストランスレーションが盛んに起こっていることを明らかにした。次にN末端アミノ酸配列分析により、それぞれの温度における標的タンパク質のうちのいくつかを同定した。それらの中にはストレス応答遺伝子産物(PerR)、カタボライト抑制を受ける遺伝子産物(TreP)など興味深いものが含まれていた。TrePのトランストランスレーション産物は、プロテアーゼで消化した後、MALDI TOF MASを用いてアミノ酸配列を解析し、TrePからタグペプチドへの切り替え位置を調べた。その結果、切り替えはTrePの内部に存在するCre配列(カタボライト抑制に関わるリプレッサータンパク質CcpAの認識配列)のすぐ上流から起こっていることが明らかになった。CcpAの欠損株を作成したところ、そこではTrePのトランストランスレーション産物も消失していた。CcpA欠損株においては、TreP以外のトランストランスレーション産物の多くが消失していた。以上のように、トランストランスレーション反応がCcpAを介したカタボライト抑制全般に関与する可能性が示唆された。現在、並行してPerRのトランストランスレーション産物の解析を行っているところである。一方、大腸菌のトランストランスレーションの標的タンパク質についてもそのいくつかを明らかにすることができた。その中で、現在MetEおよびYfiAについてトランストランスレーション反応産物の詳しい解析を行っているところである。MetEに関しては、coding領域の途中数カ所において、YfiAに関してはC末端ごく近傍において、トランストランスレーションが起こっているというデータを得ている。

The first step is to change the expression of the mRNA and the second step is to change the expression of the tmRNA and the third step is to change the expression of the tmRNA. This study is aimed at exploring the unique features of the product. The method uses medium and high temperature tmRNA to mediate the reaction between normal temperature (37℃) and high temperature (50℃). The N-terminal acid alignment analysis is performed in the same way as the temperature index. In addition, the production of PerR, TreP and other products is also very interesting. Trep's first batch of products was digested and MALDI TOF MAS was used to analyze the acid sequence. Trep's first batch of products was adjusted. As a result, there is a Cre arrangement in the internal part of the TreP. CcpA's deficit is due to the disappearance of the product. CcpA is a defective strain, and many of the products other than TreP disappear. The possibility of the above is shown by the fact that the CcpA is not available. Now, the analysis of the product of the reaction is carried out. A party, large intestine bacteria and other factors of the standard of the quality of the product. MetE and YfiA analysis of the reaction products in detail MetE is related to the coding field, and the coding field is related to the coding field. YfiA is related to the coding field.