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原核細胞イオン輸送系の解析に基づく種を超えた基本構造の探策

基于原核细胞离子传输系统分析探索物种之外的基本结构

基本信息

批准号：
15013225
负责人：
魚住信之
金额：
$ 2.62万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15013225/
关键词：
原核生物真核生物輸送系膜膜蛋白質 Na^+K^+イオン選択性

项目摘要

らん藻Ktr系の破壊株のイオン輸送機能を野生株と比較した。らん藻の破壊株のK^+輸送は減少していることが分かった。また、本輸送系はNa^+に強い依存性があるが、Na^+の輸送活性はほとんど見いだせなかった。また、pHは中性付近で最も輸送活性が高いが、プロトンイオノフォアの添加で輸送活性が阻害されたことから、プロトン駆動力が必須であることが明らかとなった。一方、Ktr破壊株で検討した培養条件で同じ表現系を示すらん藻の二成分系変異株をスクリーニングしたが、Ktr系の破壊株で阻害を受ける二成分系変異株は取得できなった。Ktr/HKT系のイオン選択孔の中には塩基性アミノ酸(Arg)が存在する。ArgをLysへの置換はK^+輸送活性に影響を与えなかった。一方、AlaやGluへの置換はK^+輸送活性を減少させた。本残基がNa^+選択性にも関与することが示唆された。シロイナズナおよび大腸菌KUPの膜貫通構造をCystein scanning法で決定する。既に蛋白質内に存在する4っのCysをSerに置換してもK^+輸送活性を維持することを確認している。膜貫通領域の前後にCysを導入し、スフェロプラストを用いて膜透過性NEM-biotinmaleimideと膜非透過性MTSETの2つのSH試薬を用いて膜トポロジーを決定したした。先にアルカリフォスファターゼ融合法で決定したシロイナズナAtKUP1のトポロジーと比較したところ異なる箇所が見出された。

The broken strain of Ktr can be used in wild plants as compared with wild plants. The algae broke the plant K^ + and sent it to you less than you could tell. This transport system is Na^ +, which strongly depends on the quality of the product, and Na^ + is responsible for the activity of the device. The temperature and pH value of the neutral medium is close to the most active one, and it is necessary to increase the activity to prevent the damage, and to make sure that the dynamic force must be adjusted. On the one hand, the conditions for the culture of Ktr strains were the same as those of the table, showing that the two-component strains of Alternaria alternata and Ktra strains were blocked and blocked. The Ktr/HKT system selects the presence of basic acid (Arg) in the hole. Arg "Lys" sets "K^ +" to send active movies and "movies". On the other hand, Alaeagle Glu sets the key K ^ + to send activity to reduce the number of users. This residual base Na ^ + is optional to indicate that you are instigated. The method of Cystein scanning was used to determine the membrane of KUP. There is a key 4 Cys Ser in the protein to maintain the activity of the message K^ +. Before and after the membrane is used in the field, the membrane is permeable, the permeable NEM-biotinmaleimide membrane is permeable, the non-permeable NEM-biotinmaleimide membrane is not permeable, and the SH membrane is used to determine the performance of the membrane. First of all, the fusion method determines the accuracy of the fusion method, which determines the accuracy of the fusion method.