進行停止時におけるDNA複製フォークの分子構造

过程停滞期间 DNA 复制叉的分子结构

• 批准号: 15023235
• 负责人: 中川 拓郎
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Osaka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15023235/
• 关键词: DNA複製; 複製フォーク; MCMヘリケース; 分裂酵母; S期チェックポイント; DNAダメージチェックポイント; ゲノム安定性維持; 発ガン機構

DNA傷害や染色対高次構造など様々な要因により、DNA複製は阻害される。この時、チェックポイント機構などにより、進行途中で停止した複製中間体(複製フォーク)が安定維持される。その結果、ゲノム安定性が保持され、細胞死や癌化が防御される。我々は、複製フォーク上に存在するPNAヘリケース、MCM、が複製フォークの安定化に関与するのではないかと考え、分裂酵母MCM4、MCM6遺伝子の変異株のスクリーニングを行った。その結果、複製阻害剤(ヒドロキシウレア(HU)、メチルメタンスルホン酸)に高感受性を示す新規mcm4、mcm6変異株の単離に成功した。変異部位が共に、ロイシンジッパーを呈するC末領域に存在することから、蛋白間相互作用に欠損を持つ可能性が考えられる。単鎖DPNA結合蛋白RPA、PI3関連キナーゼRAD3、PCNA様チェックポイント因子RAD9蛋白の進行停止時に見られる複製フオークへの局在を解析した結果、mcm4変異株ではRAD9の局在の特異的な遅延が見られた。また、DNAダメージチェックポイントキナーゼCHK1のリン酸化は見られる一方、S期チェックポイントキナーゼCDS1/CHK2の活性化がほとんど見られなかった。これらの結果から、MCMヘリケースは、RAD9蛋白の複製フォークの認識を制御することで、S期チェックポイント活性化を誘導する可能性が考えられる。

DNA damage や staining to higher-order structure な 々な is mainly caused by によ and DNA replication <s:1> obstruction される. こ の, チ ェ ッ ク ポ イ ン ト institutions な ど に よ り, carrying out で stop し た replication intermediates (copy フ ォ ー ク) が stability and maintain さ れ る. Youdaoplaceholder0 そ results, ゲノム stability が maintenance され, cell death や carcinogenesis が defense される. I 々 は, duplicate フ ォ ー ク に exist on す る PNA ヘ リ ケ ー ス, MCM, が copy フ ォ ー ク の stabilization に masato and す る の で は な い か と え test, splitting yeast MCM4, MCM6 heritage 伝 son の - different strains の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た. そ の resistance against one of the result, the copy (ヒ ド ロ キ シ ウ レ ア (HU), メ チ ル メ タ ン ス ル ホ ン acid) に high susceptibility を す in new rules MCM4, MCM6 - different strains の 単 from に successful し た. - different parts が に, ロ イ シ ン ジ ッ パ ー を show す に る C at the end of the field exist す る こ と か ら, protein interaction between に owe loss possibility を hold つ が exam え ら れ る. 単 lock DPNA binding protein RPA, PI3 masato even キ ナ ー ゼ RAD3, PCNA others チ ェ ッ ク ポ イ ン ト factor to stop RAD9 protein の に see ら れ る copy フ オ ー ク へ の bureau in analytical し を た results, MCM4 - different strains で は RAD9 の bureau in の specific な 遅 delay が see ら れ た. ま た, DNA ダ メ ー ジ チ ェ ッ ク ポ イ ン ト キ ナ ー ゼ CHK1 の リ ン acidification は see ら れ る party, S phase チ ェ ッ ク ポ イ ン ト キ ナ ー ゼ CDS1 / CHK2 の activeness が ほ と ん ど see ら れ な か っ た. こ れ ら の results か ら, MCM ヘ リ ケ ー ス は, RAD9 protein の copy フ ォ ー ク の know を suppression す る こ と で, S phase チ ェ ッ ク ポ イ ン ト activation induced す を る possibility が exam え ら れ る.

项目成果

Ono Y, Tomita K, Matsuura A, Nakagawa T, Masukata H, Uritani M, Ushimaru T, Ueno M.: "A novel allele of fission yeast rad11 that causes defects in DNA repair and telomere length regulation."Nucleic Acids Research. 31・24. 7141-7149 (2003)

Ono Y、Tomita K、Matsuura A、Nakakawa T、Masukata H、Uritani M、Ushimaru T、Ueno M.：“裂殖酵母 rad11 的一种新型等位基因，会导致 DNA 修复和端粒长度调节缺陷。”核酸研究 31。・24。7141-7149（2003）