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DNA複製フォークの修復検出系の開発とフォーク修復に関わる新規遺伝子の単離

DNA复制叉修复检测系统的开发以及参与叉修复的新基因的分离

基本信息

批准号：
13780555
负责人：
中川拓郎
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2002
项目状态：
已结题

项目摘要

DNA複製フォークの維持機構の解明を通じて、ゲノム安定性を確保するメカニズムの理解を目指す。複製フォークが停止あるいは衝突した場合、フォークの崩壊を防ぐ為に相同DNA配列間でDNA組換えが起こる。このような組換えに関わる因子を同定する為に、分裂酵母の染色体上に反復配列(ade6B;ura4+:ade6X)を導入し、様々な変異株を用いてade6ヘテロアリル間での相同組換え頻度を調べた。その結果、複製フォーク上に存在し、その進行に必至なMCM DNAヘリケースとその活性化因子Cdc45が、反復配列間DNA組換えに必要である事が分かった。また、これらMCM、Cdc45の変異株(nda4、sna41)は、DNA複製阻害剤ヒドロキシウレア(HU)添加時に起こるM期の遅延に欠損を持ち、致死となる、つまり、細胞周期制御に欠損を持つ事が分かった。そこで、Cds1(S期チェックポイント因子)とMCM、Cdc45との関連を調べた結果、複製停止時に起こるCds1蛋白のリン酸化とCds1キナーゼの活性化にMCM、Cdc45が関わる事が明らかとなった。よって、DNA複製フォークが停止した際、MCM、Cdc45がフォークの停止を認識し、Cds1チェックポイントキナーゼを活性化すると考えられる。しかし、nda4、sna41変異は、Cds1とMrc1(Cds1活性化因子)破壊株のHU感受性を部分的に抑制する事が分かった。更に、nda4変異は、Rqh1(RecQヘリケースファミリー)破壊株の、HU感受性とMMS(DNAアルキル化剤)感受性をも抑制した。従って、MCM、Cdc45は、Cds1の活性化に留まらず、停止した複製フォークがどの様な修復・チェックポイント経路によりプロセッシングされるのかを選択する重要な役割を担っていると考えられる。

The DNA replicator is responsible for the maintenance of information and stability to make sure that the target is well understood. In order to prevent the collapse of the same DNA, it is necessary to configure the DNA system in the same way. The ade6B;ura4+:ade6X gene on the chromosome of mitotic yeast was identified as the same as that of the control group, and the strain of the mitotic yeast was transformed by the reverse alignment (ade6B;ura4+:ade6X) of the mitotic yeast chromosome, and the strain of the mitotic yeast was isolated from the same tissue. The result of the test, the replication file has an error, the activation factor Cdc45 is required for the MCM DNA queue, and the DNA configuration between the anti-configuration queues needs to be checked. Cycles, MCM, Cdc45 isolates (nda4, sna41), and DNA copies prevent the addition of short-term cycles (HU). When they are added, there is a delay of short-term response, lethal response, response, and cell cycle control. The results of MCM, Cds1, CDc45, Cds1 protein acidification, Cds1 activation, MCM activation, CDc45, CDc45, CDc Please, DNA copy, stop, MCM, Cdc45, stop knowing, Cds1, copy, copy. Nda4, nda4, sna41 receptor, CDs 1 receptor Mrc1 (HU activating factor) break the inhibition activity in the part of HU receptivity. Nda4, HU, Rqh1 (RecQ sensitivity), MMS (DNA sensitivity), MMS (DNA sensitivity), inhibition (inhibition). Make sure that MCM, Cdc45, and Cds1 are active and active, and that you need to stop copying and repairing the road.