機能性RNAを用いた制癌戦略

使用功能性RNA的癌症控制策略

• 批准号: 15025222
• 负责人: 小黒 明広
• 金额: $ 3.78万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025222/
• 关键词: RNA; アプタマー; 癌; 翻訳; SELEX

本研究は、タンパク質とRNAという異なる素材の生体高分子の間の「分子擬態」(研究分担者・中村ら発見)という概念と、研究代表者が既に実施しているタンパク質への特異的な結合性を付与するRNA分子(RNAアプタマー)を取得するSELEX法を組み合わせて、近年がんとの関連性が指摘されている翻訳開始因子(eukaryotic Initiation Factor、eIF)に特異的に結合し、がんの診断・治療に応用できる新規のRNA創薬を目指すものである。本年度の研究より、eIFをターゲットに、タンパク質精製→SELEX→アプタマーの取得→生化学的解析というラインを確立し、複数種類のRNAアプタマーを取得した。これらのアプタマーは標的タンパク質の機能を阻害し、in vitroでのタンパク質翻訳を阻害した。さらに、アプタマーをリポフェクション法で培養細胞に導入し、細胞内での翻訳阻害効果も確認する事ができた。また、アプタマーによる共沈実験により、培養細胞破砕液より標的タンパク質を特異的に検出できる事が分かった。さらにアプタマーと標的タンパク質の結合様式の解析結果から、RNAアプタマーはその配列全体でかなり広範囲の標的タンパク質の構造を認識している事が示唆されてきた。このことは、変異により構造変化を伴って疾病につながるような原因因子に対して、変異型と野生型のタンパク質を識別する事が可能なアプタマーを作製すれば、より副作用の少ない薬の開発につながると考える。以上より、本研究によりRNAアプタマーを用いた診断薬、治療薬の開発については、実用化の為に解決すべき問題は多いが、feasibility studyとして、その可能性を十分に示す事ができたと考える。

这项研究旨在将由蛋白质和塞莱克斯方法与SELEX方法结合在一起，将“分子模仿者”的概念结合在一起，例如蛋白质和RNA（Nakamura等人发现），将RNA分子（RNA APTAMERS）获取具有与蛋白质的特定结合，从而使蛋白质具有启动的蛋白质，从而创造出了新的rrNA，从而使RNA分子（RNA APTAMERS）赋予了DREATION，从而产生了均具有的依据，从而创造了一种依赖于蛋白质的结合。 （EIF），近年来已经指出与癌症有关，可以应用于癌症的诊断和治疗。从今年的研究中，我们建立了一条靶向EIF，蛋白质纯化→SELEX→APTAMER获取→生化分析的线路，并获得了多种类型的RNA适体。这些适体抑制了靶蛋白的功能，并在体外抑制了蛋白质翻译。此外，通过脂化将适体引入培养的细胞中，并且还确认了细胞内抑制翻译的作用。此外，与适体的共沉淀实验表明，可以从培养的细胞中断中特别检测靶蛋白。此外，对适体和靶蛋白的结合模式的分析表明，RNA适体在其序列中识别出相当广泛的靶蛋白结构。这表明，如果适体可以将突变体和野生型蛋白与导致由于突变引起的疾病的病因区分，这将导致副作用较少的药物的发展。基于上述研究，这项研究表明，需要解决许多问题，用于实际应用使用RNA适体的诊断和治疗药物，但是作为一项可行性研究，我们已经能够充分证明这种可能性。

项目成果

小黒明広, 中村義一: "生命科学(柳田充弘、佐藤文彦、石川冬木編)"東京化学同人. 228 (2004)

小黑明宏、中村芳一：“生命科学（柳田光宏、佐藤文彦、石川冬树编辑）”东京化学同人 228 (2004)。

Oguro, A., Ohtsu, T., Svitkin, Y.V., Sonenberg, N., Nakamura, Y.: "RNA aptamers to initiation factor 4A helicase hinder cap-dependent translation by blocking ATP hydrolysis."RNA. 9. 394-407 (2003)

Oguro, A.、Ohtsu, T.、Svitkin, Y.V.、Sonenberg, N.、Nakamura, Y.：“起始因子 4A 解旋酶的 RNA 适体通过阻断 ATP 水解来阻碍帽依赖性翻译。”RNA。