脊髄内抑制性ニューロン回路による脊髄視床路ニューロン出力制御機構の解析

椎管内抑制神经元环路分析脊髓丘脑束神经元输出控制机制

• 批准号: 15029255
• 负责人: 籾山 明子
• 金额: $ 4.22万
• 依托单位: National Institute for Physiological Sciences (2004)Okazaki National Research Institutes (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15029255/
• 关键词: 脊髄視床路; GAD; GFP; 逆行性標識; パッチクランプ

脊髄視床路(STT)ニューロンは、脊髄からの侵害性信号を上位中枢に出力するニューロンであり、出力信号である活動電位パターンは、侵害性刺激の性質および強度と密接に関連すると想定されている。申請者の近年の研究において、逆行性標識法により脊髄スライスSTTニューロンを顕微鏡下に同定してパッチクランプ解析を行なうことが可能になり、これまでの成果から、抑制性入力がSTTニューロンのHCNチャネルを活性化し、リバウンド活動電位として出力を誘発することを見出した。このリバウンド活動電位が侵害受容に果たす役割や、そのための脊髄内抑制性神経回路の構築を解明することが本研究の目的である。本研究では、GABA合成酵素であるGAD67遺伝子に蛍光標識GFP遺伝子を導入した遺伝子改変マウス(以下GAD-GFPマウスと略記)を使用した。GAD-GFPマウスのゲノタイピングを行なう際、蛍光実体顕微鏡を用いて手技を簡易化した。生後日齢12-14日動物を脳定位固定装置に固定し、視床VPL核に逆行性トレーサーとして蛍光ビーズまたは蛍光色素付きコレラ毒素Bサブユニットを注入した。2-3日の回復期間後、マイクロスライサーを用いて腰部脊髄スライス標本を作成し、蛍光顕微鏡下に標識ニューロンを同定して、パッチクランプ実験を行なった。平成15年度は、標識ニューロンの電気生理学的特性および標識ニューロンへのシナプス入力特性に関する基本的解析に焦点を当てて実験を行なった。

Spine table circuit (STT): Invasive signals from spinal cord and spinal cord are related to the activity potential of the upper central nervous system, the nature and intensity of the invasive stimulus. In recent years, the applicant's research on retrograde labeling method has shown that STT can be activated and activated by inhibitory force, and the activity potential of STT can be induced by inhibitory force. The purpose of this study is to elucidate the structure of inhibitory neural circuits in the spinal cord. In this study, GAD67 gene was used to introduce GFP gene into GAD67 gene. GAD-GFP makes it easy to use optical microscopes. After birth, the animal was fixed by a fixed device, and the VPL nucleus was injected with a light pigment. 2-3 After the recovery period of the day, it is necessary to use the waist ridge to make the logo under the microscope. In 2015, the focus of basic analysis on electrophysiological characteristics and stress characteristics of the marker was carried out.

项目成果

Momiyama, A. et al.: "The density of AMPA receptors activated by a transmitter quantum at the climbing fibre-Purkinje cell synapse in immature rats"Journal of Physiology. 549.1. 75-92 (2003)

Momiyama, A. 等人：“未成熟大鼠攀爬纤维浦肯野细胞突触处的递质量子激活的 AMPA 受体密度”生理学杂志。

籾山明子, 重本隆一: "神経回路の機能発現のメカニズム"共立出版. 500 (2004)

Akiko Momiyama、Ryuichi Shigemoto：“神经回路功能表达的机制”Kyoritsu Shuppan 500 (2004)。