微小環境液性因子に着目した難治性卵巣癌腹膜播種機構の解明

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1)卵巣癌における腹膜中皮細胞の活性化について解析を行った。手術検体の大網組織より腹膜中皮細胞を分取し、TGF-β、卵巣癌細胞株SKOV3, ES2の培養上清、癌性腹水を添加すると、敷石状から紡錘形の線維芽細胞様に形態変化した。この変化により、Eカドヘリンは低下、Nカドヘリンは上昇することを、ウエスタンブロットにて確認した。またcancer-associated fibroblastのマーカーであるαSMAの発現は上昇した。2)正常の中皮細胞とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞において、mRNAレベルの発現をreal time PCRにて評価した。TGF-βの添加により、TGF-β1、VEGF-A、IGF-1,2、MMP-2,9の有意な上昇が認められ、時間依存性に上昇、またTGF-βの濃度依存性に上昇がみられた。正常の中皮細胞とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞のTGF-β1、VEGF-A、MMP-2,9の分泌を、それぞれの培養上清を用いELISA法にて評価した。形態変化した腹膜中皮細胞では、正常の中皮細胞と比較して、これらの分泌が有意に上昇していた。3) ヒト臍帯静脈内皮細胞human umvilical vein endothelial cell(HUVEC)を用い、腹膜中皮細胞の液性因子が血管内皮細胞に与える影響を検討した。正常の中皮細胞の培養上清とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞の培養上清を用い、migration assayおよびtube formation assayを行った。形態変化した中皮細胞の培養上清を用いた場合において、HUVECの遊走能は有意に亢進していた。また同様にHUVECのチューブ形成も亢進を認めた。