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微小環境液性因子に着目した難治性卵巣癌腹膜播種機構の解明

以微环境体液因素阐明难治性卵巢癌腹膜播散机制

基本信息

批准号：
15K20139
负责人：
三井寛子
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2015
资助国家：
日本
起止时间：
2015-04-01 至 2016-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15K20139/
关键词：
卵巣癌腹膜播種微小環境

项目摘要

1)卵巣癌における腹膜中皮細胞の活性化について解析を行った。手術検体の大網組織より腹膜中皮細胞を分取し、TGF-β、卵巣癌細胞株SKOV3, ES2の培養上清、癌性腹水を添加すると、敷石状から紡錘形の線維芽細胞様に形態変化した。この変化により、Eカドヘリンは低下、Nカドヘリンは上昇することを、ウエスタンブロットにて確認した。またcancer-associated fibroblastのマーカーであるαSMAの発現は上昇した。2)正常の中皮細胞とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞において、mRNAレベルの発現をreal time PCRにて評価した。TGF-βの添加により、TGF-β1、VEGF-A、IGF-1,2、MMP-2,9の有意な上昇が認められ、時間依存性に上昇、またTGF-βの濃度依存性に上昇がみられた。正常の中皮細胞とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞のTGF-β1、VEGF-A、MMP-2,9の分泌を、それぞれの培養上清を用いELISA法にて評価した。形態変化した腹膜中皮細胞では、正常の中皮細胞と比較して、これらの分泌が有意に上昇していた。3) ヒト臍帯静脈内皮細胞human umvilical vein endothelial cell(HUVEC)を用い、腹膜中皮細胞の液性因子が血管内皮細胞に与える影響を検討した。正常の中皮細胞の培養上清とTGF-βの添加により形態変化した中皮細胞の培養上清を用い、migration assayおよびtube formation assayを行った。形態変化した中皮細胞の培養上清を用いた場合において、HUVECの遊走能は有意に亢進していた。また同様にHUVECのチューブ形成も亢進を認めた。

1)The activation of peritoneal mesothelioma cells in ovarian cancer is analyzed. The morphology of mesothelioma cells isolated from the large reticular tissue of the surgical specimen, TGF-β, culture supernatant of ovarian carcinoma cell lines SKOV3, ES2, addition of carcinomatous ascites, and stone-like, spindly, and vascular bud cells was changed. This is the first time I've ever seen a woman. Cancer-associated fibroblast development 2)The expression of TGF-β in normal mesothelioma cells was evaluated by real time PCR. TGF-β addition, TGF-β1, VEGF-A, IGF-1, 2, MMP-2, 9 intentional increase, time-dependent increase, TGF-β concentration-dependent increase. The expression of TGF-β1, VEGF-A, MMP-2 and MMP-9 in cultured supernatant of normal mesothelioma cells was evaluated by ELISA. Morphological changes in peritoneal mesothelioma cells, compared with normal mesothelioma cells, increased secretion 3)To investigate the effects of cytokines on human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) and peritoneal mesothelial cells The culture supernatant of normal mesothelioma cells and the addition of TGF-β, migration assay and tube formation assay were performed. In the case of morphological transformation, the culture supernatant of HUVEC is intentionally enhanced. The same HUVEC and the other HUVEC