精母細胞に於いて miR-34c と共局在する因子の探索とその意義の解析

寻找精母细胞中与miR-34c共定位的因子并分析其意义

• 批准号: 16K18979
• 负责人: 遠藤 大輔
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-01 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-16K18979/
• 关键词: microRNA; 超解像顕微鏡; 精子形成細胞; 共局在; 免疫沈降; 精子形成; in vivio electroporation; in situ hybridization

本研究の目的は超解像顕微鏡を用い、mir-34c の精母細胞に於ける局在を詳細に解析することにより、このmicroRNA と相互作用するタンパク質及びmRNAを同定することによりその減数分裂に於ける役割を明らかにすることである。平成28年度には超解像顕微鏡を用い、複数に因子の相互作用を観察する手法を確立する目的で、PCNA及びそれと相互作用するドメインを持つメチル基転移酵素1の共局在解析を行った。構造化照明法による解析により、これら2因子が100 nm 未満という非常に近い距離で精母細胞核内に共局在していることが観察された。また、免疫沈降法により精巣に於いてこれらが相互作用していることも明らかとなった。平成29年度にはmir-34cを他のRNAとの二重染色により解析する手法の開発を行った。mir-34c 及び 28S rRNA の二重染色を行うと、mir-34c 精母細胞の細胞質に雲上に広がるばかりではなく、核内の一部に局在していた。その局在部位は28S rRNA の核内での局在領域と重なっていることから、核小体であると考えられ、精母細胞においてmir-34cは核小体にストックされていることが明らかとなった。また、光活性局在法により、50 nm未満の距離でこれらの因子が共局在していることも観察された。以上の結果から、mir-34c がどのような因子と共局在しているかを詳細に解析する準備は整ったといえる。平成30年度は研究を中断していたため、実績は上がっていない。

Purpose this study の は super resolution 顕 micromirror を い, mir - 34 c の spermatocyte に in け る bureau in detailed analytical す に を る こ と に よ り, こ の mirnas と interaction す る タ ン パ ク qualitative and び mRNA を with fixed す る こ と に よ り そ に の meiosis in け る "を cut Ming ら か に す る こ と で あ る. Pp.47-53 28 year に は super resolution 顕 micromirror を い, plural に factor の interaction を 観 examine す る gimmick を establish す る purposes で, PCNA and び そ れ と interaction す る ド メ イ ン を hold つ メ チ ル base planning shift enzyme 1 の total bureau on line analytical を っ た. Structured illumination method に よ る parsing に よ り, こ れ ら 2 factor が 100 nm not against と い う very nearly い distance に で fine に total bureau within the nuclei in し て い る こ と が 観 examine さ れ た. ま た, immune sink に よ り fine 巣 に in い て こ れ ら が interaction し て い る こ と も Ming ら か と な っ た. In Heisei 29, に mir-34cを other <s:1> RNAと <s:1> double staining によ analysis する technique <e:1> development を row った. Mir - 34 c and 28 s rRNA び の line double staining を う と, mir - 34 c spermatocyte の cytoplasm に cloud に hiroo が る ば か り で は な く, nuclear の within a に bureau in し て い た. そ の bureau in parts は 28 s rRNA の intranuclear で の bureau in field と な っ て い る こ と か ら, nucleosome で あ る と exam え ら れ, spermatocyte に お い て mir - 34 c は nucleosome に ス ト ッ ク さ れ て い る こ と が Ming ら か と な っ た. ま た, optical activity in に よ り, 50 nm not against の distance で こ れ ら の factor が total bureau in し て い る こ と も 観 examine さ れ た. の above results か ら, mir - 34 c が ど の よ う な factor と total bureau in し て い る か を detailed analytical す に る prepare は whole っ た と い え る. In the year Heisei 30, the を research を was interrupted and the て て たため たため たため was achieved, and the actual performance is on the がって がって な な な.

项目成果

マウス精母細胞に於いて染色体動態を制御するDnmt1と共局在する核内因子の解析。

分析与 Dnmt1 共定位的核因子，Dnmt1 控制小鼠精母细胞的染色体动力学。

• 发表时间: 2016
• 作者: 遠藤大輔;柴田恭明;小路武彦
• 通讯作者: 小路武彦

マウス精母細胞に於けるDnmt1発現抑制が共局在因子の核内発現に及ぼす影響の解析

抑制小鼠精母细胞Dnmt1表达对共定位因子核表达的影响分析

• 发表时间: 2017
• 作者: 柴田恭明;中島和慶;遠藤大輔;池田 通;小路武彦;遠藤大輔・柴田恭明・小路武彦
• 通讯作者: 遠藤大輔・柴田恭明・小路武彦

マウス精母細胞に於ける DNA メチル基転移酵素による染色体ダイナミクスの制御

DNA甲基转移酶对小鼠精母细胞染色体动力学的控制

• 发表时间: 2017
• 作者: 遠藤大輔;柴田恭明;小路武彦
• 通讯作者: 小路武彦