精母細胞に於いて miR-34c と共局在する因子の探索とその意義の解析

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本研究の目的は超解像顕微鏡を用い、mir-34c の精母細胞に於ける局在を詳細に解析することにより、このmicroRNA と相互作用するタンパク質及びmRNAを同定することによりその減数分裂に於ける役割を明らかにすることである。平成28年度には超解像顕微鏡を用い、複数に因子の相互作用を観察する手法を確立する目的で、PCNA及びそれと相互作用するドメインを持つメチル基転移酵素1の共局在解析を行った。構造化照明法による解析により、これら2因子が100 nm 未満という非常に近い距離で精母細胞核内に共局在していることが観察された。また、免疫沈降法により精巣に於いてこれらが相互作用していることも明らかとなった。平成29年度にはmir-34cを他のRNAとの二重染色により解析する手法の開発を行った。mir-34c 及び 28S rRNA の二重染色を行うと、mir-34c 精母細胞の細胞質に雲上に広がるばかりではなく、核内の一部に局在していた。その局在部位は28S rRNA の核内での局在領域と重なっていることから、核小体であると考えられ、精母細胞においてmir-34cは核小体にストックされていることが明らかとなった。また、光活性局在法により、50 nm未満の距離でこれらの因子が共局在していることも観察された。以上の結果から、mir-34c がどのような因子と共局在しているかを詳細に解析する準備は整ったといえる。平成30年度は研究を中断していたため、実績は上がっていない。