モルヒネの微生物生産システム構築のためのベルベリン炭素骨格開裂機構の解明

阐明小檗碱碳骨架裂解机制构建吗啡微生物生产系统

• 批准号: 17K15470
• 负责人: 石川 和樹
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Hoshi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-01 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-17K15470/
• 关键词: モルヒネ; アルカロイド; ベルベリン; Rhodococcus; 微生物生産

[Step 1] BCE 候補遺伝子の探索Rhodococcus sp. BD7100株におけるBCE候補遺伝子の選抜を目的に、トランスポゾン挿入BBR分解能欠損株のひとつであるTB537株のドラフトゲノムシーケンスを行った。その結果、トランスポゾンがORF6192とORF6193の遺伝子間領域に挿入されていることが明らかになった。さらに、新たにBBR資化性菌として単離したArthrobacter sp. GBD-1株のBBR分解能を解析した結果、BD7100株と類似したBBR分解経路（分解産物としてD-BBRおよびseco-D-BBRを検出）を有している可能性が示唆された。そこで、ドラフトゲノム情報から特定したBBR脱メチレン遺伝子brdA(ORF4430)の近傍に存在し、BD7100株のbrdAの近傍に存在する遺伝子と相同性を示す遺伝子の破壊株を作製した。各破壊株の休止菌体を用いてseco-D-BBR産生能を評価した結果、ORF4420破壊株においてseco-D-BBRの生産能が消失していた。以上の結果からBD7100株由来遺伝子ORF6191,6192およびGBD-1株由来ORF4420をBCE候補遺伝子とした。[Step 2] BCE 遺伝子の特定Step 1で選抜した候補遺伝子のBBR骨格開裂反応への関与を検証するために、各遺伝子をRhodococcus sp.発現用ベクターpTip-QC1にbrdAと共に導入したベクターを作製した。これらをRhodococcus sp. PR4株にそれぞれ導入し、得られた形質転換体の休止菌体のBBR分解能を検証した。その結果、形質転換体の休止菌体によるD-BBRへの変換は確認できたが、seco-D-BBRの産生は確認できなかった。そのため、現段階ではBCEの特定には至っていない。

(Step 1) BCE alternate heritage 伝 son の explore Rhodococcus sp. BD7100 strains に お け る BCE alternate heritage 伝 の choose sorting に を purpose, ト ラ ン ス ポ ゾ ン scions in BBR decomposition can owe damage strain の ひ と つ で あ る TB537 strains の ド ラ フ ト ゲ ノ ム シ ー ケ ン ス を line っ た. そ の results, ト ラ ン ス ポ ゾ ン が ORF6192 と ORF6193 の heritage 伝 sub area between に scions into さ れ て い る こ と が Ming ら か に な っ た. Youdaoplaceholder0, new たにBBR informatizing bacteria と たに て単 dissociated たArthrobacter sp. GBD - 1 strain の BBR can decompose を parsing し た results, BD7100 と similar し た BBR decomposition 経 road (breakdown products と し て D - BBR お よ び seco - D - BBR を 検) を have し て い が る possibility in stopping さ れ た. そ こ で, ド ラ フ ト ゲ ノ ム intelligence か ら specific し た BBR メ off チ レ ン posthumous son 伝 brdA (ORF4430) の almost exist alongside に し, BD7100 の brdA の nearly exist alongside に す る posthumous son 伝 と identity を shown す heritage の broken 壊 strains を son 伝 system し た. Each broken 壊 を の rest bacteria strains with い て seco - D - BBR can produce を review 価 し た results, ORF4420 壊 strains に お い て seco - D - BBR の production can disappear が し て い た. The above <s:1> results show that the と of the BD7100 strain is the 伝 seed ORF6191,6192および of the GBD-1 strain is the ORF4420を of the BCE candidate seed 伝 と of the た. [Step 2] BCE heritage 伝 son の specific Step 1 で choose sorting し た alternate heritage 伝 son の BBR bone crack the 応 へ の masato and を 検 card す る た め に, all survived 伝 を Rhodococcus sp. 発 current ベ ク タ ー pTip - QC1 に brdA と に total import し た ベ ク タ ー を cropping し た. こ れ ら を Rhodococcus sp. PR4 strains に そ れ ぞ れ import し, ら れ た form quality planning in body の resting bacteria の BBR can decompose を 検 card し た. そ の results, form quality planning in body の resting bacteria に よ る D - BBR へ の variations in は confirm で き た が, seco - D - BBR の produce は confirm で き な か っ た. Youdaoplaceholder0 ため ため, current rank で そ BCE is specific に に to って な な な.

项目成果

ベルベリン資化性菌Rhodococcus sp. BD7100株がオウレンエキス添加培養時に産生する抗菌物質に関する検討

小檗碱同化菌红球菌 BD7100 菌株与 Orensis 提取物培养时产生抗菌物质的研究

• 发表时间: 2017
• 作者: 石川和樹;吉田陽菜花;武田尚;若菜大悟;東條元昭;佐藤文彦;細江智夫
• 通讯作者: 細江智夫

星薬科大学薬化学教室

星药科大学药物化学系