組織特異的転写因子レギュロンによるコレステロール代謝制御機構の解明

我々のこれまでの解析から、ライディッヒ細胞においてAd4BP/SF-1をノックダウンすると、コレステロール合成に関与する20個の遺伝子全ての発現量が有意に減少することが明らかになっている。そこで、Ad4BP/SF-1がコレステロール合成に寄与していることを示すため、マウス副腎皮質由来の癌細胞株であるY-1細胞を用いて、コレステロール合成量の定量実験を行った。副腎皮質は精巣のライディッヒ細胞と同様にAd4BP/SF-1が高発現している組織であり、Y-1細胞を用いたAd4BP/SF-1のノックダウンによってもコレステロール合成系遺伝子の発現量が低下する事を確認している。Y-1細胞においてAd4BP/SF-1のノックダウン処理を48時間行い、その後14Cでラベルされた酢酸を加えて、さらに24時間培養した。14Cの添加と同時にエステル化の阻害剤である58-035とステロイド合成を阻害するAminoglutethimideを加えて、コレステロールの変換や消費をブロックした。24時間培養後に、14Cでラベルされたコレステロールを薄層クロマトグラフィーで分離し、液体シンチレーションカウンターで定量することによって、de novoで合成されたコレステロール量を算出した。siControl処理群とsiAd4BP/SF-1処理群のde novoコレステロール合成量を比較したところ、siAd4BP/SF-1処理群では有意にコレステロール合成量が減少していた。この結果から、Ad4BP/SF-1がコレステロール合成に直接的に寄与している事が示された。

我々のこれまでの解析から、ライディッヒ細胞においてAd4BP/SF-1をノックダウンすると、コレステロール合成に関与する20個の遺伝子全ての発現量が有意に減少することが明らかになっている。そこで、Ad4BP/SF-1がコレステロール合成に寄与していることを示すため、マウス副腎皮質由来の癌細胞株であるY-1細胞を用いて、コレステロール合成量の定量実験を行った。副腎皮質は精巣のライディッヒ細胞と同様にAd4BP/SF-1が高発現している組織であり、Y-1細胞を用いたAd4BP/SF-1のノックダウンによってもコレステロール合成系遺伝子の発現量が低下する事を確認している。Y-1細胞においてAd4BP/SF-1のノックダウン処理を48時間行い、その後14Cでラベルされた酢酸を加えて、さらに24時間培養した。14Cの添加と同時にエステル化の阻害剤である58-035とステロイド合成を阻害するAminoglutethimideを加えて、コレステロールの変換や消費をブロックした。24時間培養後に、14Cでラベルされたコレステロールを薄層クロマトグラフィーで分離し、液体シンチレーションカウンターで定量することによって、de novoで合成されたコレステロール量を算出した。siControl処理群とsiAd4BP/SF-1処理群のde novoコレステロール合成量を比較したところ、siAd4BP/SF-1処理群では有意にコレステロール合成量が減少していた。この結果から、Ad4BP/SF-1がコレステロール合成に直接的に寄与している事が示された。