脂肪細胞エクソソームへの選択的タンパク質取り込みメカニズムの解明

阐明脂肪细胞外泌体选择性蛋白质摄取机制

• 批准号: 26860216
• 负责人: 佐野 宗一
• 金额: $ 2.5万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2014
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2014-04-01 至 2015-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-26860216/
• 关键词: エクソソーム; 脂肪酸合成酵素; 質量分析

タンパク質がエクソソームへ取り込まれる際の選択性の仕組みを解明すべく、これまでの研究により選択的に脂肪細胞由来エクソソームへ取り込まれることが明らかとなっている脂肪酸合成酵素（FASN; Fatty Acid Synthase）を用いて解析を行った。申請書に示したように、FASNの8つのモジュールにそれぞれHaloタグが融合したタンパク質を発現できるベクターを作製し、293T細胞に過剰発現させることでエクソソーム内に取り込まれたモジュールを検索する実験を行うべく、ベクターを作製した。候補モジュールの同定を行い、申請者の米国留学につき、欠失変異体を用いた実験など、その後の実験は申請者の後任が継続予定である。また、脂質合成酵素群のエクソソームへの取り込みを制御する新規分子を同定すべく　HaloTag-FASNの全長を過剰発現したHEK293T細胞から、Halo結合レジンにてHaloタグ融合タンパクを精製し、結合タンパク質の質量分析計での同定を試みたが、同定されたのはFASN分解産物のみであった。また、研究を行う過程で、申請者は、これまで脂肪細胞由来エクソソームに含有されていると報告されてきたAdiponectinが、実は脂肪細胞由来エクソソームには含まれておらず、T-cadherin陽性エクソソーム（申請者は筋細胞由来と考えている）に結合する形で血液中に存在することを新たに見出した。この知見は科学誌に報告予定である。

タンパク性がエクソソームへGET り込まれる久の选択性の士组みを Explain すべく、これまでの Research により选Fatty acid synthesis enzyme (FASN; Fatty Acid Synthase）を用いてanalyticsを行った. APPLICATION FORM Halo's fusion material , 293T cells are produced inれたモジュールを検SO する実験を行 うべく, ベクターを做出した. Candidate モジュールの同定を行い、Applicant のUSA Study Abroad につき、Obviously different bodyいた実験など、その后の実験はThe applicant’s post-appointment is determined by the applicant.また, Lipid synthesis enzyme group のエクソソームへのtake り込みをcontrol するNew regulation molecule を同定すべく　HaloTag-FASNのFull lengthを高剰発appearsしたHEK293T cellsから、 Halo combines レジンにてHaloタグ fusion タンパクを refined し, combined タンパクquality のThe mass spectrometer is the same as the determination of the test and the determination of the FASN decomposition product. It containsされているとreportされてきたAdiponectinが、実はOrigin of fat cellsエクソソームには偾れておらず、T-cadherin positive エクソソーム（Applicant はsuji The origin of cells (the origin of cells), the combination of the shape of the cells, the existence of the cells in the blood, the new appearance of the cells. The report of この知见はSCIENCE will be determined by である.