ヒトおよび動物細胞内増幅遺伝子の分離とその解析

人类和动物细胞中扩增基因的分离和分析

基本信息

批准号：
61010078
负责人：
宇多小路正
金额：
$ 3.2万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1984
资助国家：
日本
起止时间：
1984 至 1986
项目状态：
已结题

项目摘要

神経芽細胞腫,その他の細胞株,摘出腫瘍のDNAについて、N-myc,pG21,clone#8等をプローブとしてDNA増幅とDNA組換えの解析を行った。1.(1)神経芽細胞腫ではN-mycの増幅が最も高頻度に見られ(52例中11例)、それらは病期【III】期,【IV】期に限られていた。N-myc増幅型では早期に転移が起るためと考えられた。(2)原発腫瘍,転移腫瘍についてN-myc,pG21,clone#8の増幅度を比較すると、同一患者についてほゞ差がなく転移以前に増幅が起ったと考えられた。(3)ヌードマウス移植系1例ではclone#8内でDNA組換えが起っており、それはA-Tが14ケ連続している部位であった。(4)肺小細胞癌4例中3例にN-mycの2〜16倍の増幅を認めたがpG21,clone#8の増幅は認めなかった。2.(1)メソトレキセート耐性チャイニーズハムスタ培養細胞の1系ではdhfr遺伝子の約40倍の増幅が認められた。この増幅遺伝子は約160bpからなるヌクレオソーム構造を持ち、ヌクレアーゼ感受性,DNAseI過敏部位の形成等の各面から見て活性クロマチン構造を形成していることが認められた。この細胞では分裂中期像に多数の二重微小染色体を認めた。(2)雌鶏胚の胚体外域の細胞の細胞質にW染色体特異的な塩基配列を有するDNA片がin situハイブリド形成により認められた。これは反復配列から形成され細胞質に移行したDNAで、増幅の一種と考えられる。3.カドミウム耐性チャイニーズハムスタ細胞にはメタロチオネイン遺伝子の、約5〜10倍の増幅を認めたが、ヒト肝癌由来,腎癌由来上皮性細胞株をカドミウム耐性にした細胞株にはメタロチオネイン遺伝子の増幅を見出すことは出来なかった。この蛋白は脊椎動物界を通じて、構造上極めて保守的であることが知られているが、その遺伝子発現の制御に関しては、哺乳類の間でも必ずしも共通ではないことを示すものと考えられた。

使用N-MYC，PG21，克隆＃8等分析DNA扩增和DNA重组，作为神经母细胞瘤，其他细胞系和切除的肿瘤的探针。 1.（1）N-MYC扩增在神经母细胞瘤中最常见（在52例中11例），这些n-myc扩增仅限于III和IV阶段。人们认为N-MYC扩增类型会引起早期转移。（2）比较原发性和转移性肿瘤的N-MYC，PG21和克隆＃8的扩增程度，同一患者几乎没有差异，并且认为在转移之前发生了扩增。（3）在一种裸鼠植入案例中，DNA重组发生在克隆＃8中，其中A-T连续14个位点。（4）四个小细胞肺癌病例中有三例显示N-MYC增加了2-16倍，但未观察到PG21和克隆＃8的扩增。 2.（1）一系列抗甲氨蝶呤的中国汉斯塔培养细胞的扩增大约是DHFR基因的40倍。该扩增基因的核小体结构由大约160 bp组成，发现它从核酸酶敏感性等各个方面形成了活跃的染色质结构，并形成了DNASEI超敏位点的形成。在该细胞中，在中期图像中观察到许多双重微色体。（2）通过原位杂交在Hen胚胎的细胞细胞中观察到具有W染色体特异性碱基序列的DNA片段。这是由重复序列形成并迁移到细胞质的DNA，被认为是一种扩增。 3。尽管在耐镉的中国汉斯塔细胞中观察到了金属硫硫蛋白基因的扩增，但在细胞系中，无法在细胞系中发现金属硫蛋白基因的扩增，这些细胞系使上皮细胞系源自人肝癌和肾脏癌和肾脏癌镉抗体。该蛋白在整个脊椎动物王国都在结构上是高度保守的，但人们认为这表明哺乳动物在其基因表达方面不一定是常见的。