遺伝子導入による自己発光性哺乳類細胞の構築とその細胞癌化・分化の解析への応用

基因转移构建自发光哺乳动物细胞及其在细胞癌变和分化分析中的应用

基本信息

批准号：
01015115
负责人：
宇多小路正
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

研究の目的:哺乳類培養細胞にホタル(Photinus pyralis)から分離されたルシフェラーゼ遺伝子を導入して、自己発光する細胞株を作り、生きた細胞内での遺伝子制御を経時的、連続的に観察、記録することの出来る系を確立する。今年度の成果:1.ホタル・ルジフェラーゼ遺伝子にはチャイニーズハムスターメタロチオネイン遺伝子のプロモータ領域を結合して、誘導可能となるよう修飾を施した。2.チャイニーズハムスタ由来CHL細胞、ミドリザル由来Cos細胞、マウス由来細胞等に上述の遺伝子を一過性に導入後、Cd^<2+>、デキサメサゾンで誘導を行った。動物種差はかなり大きく、CHL,CosではCd^<2+>、デキサメサゾンで、ルシフェラーゼの発現の誘導が可能であったが、マウス細胞では発現は低く誘導も認められなかった。3.備品として購入したルミノメータは、上記細胞10^7ケ程度の材料について、ほぼ定量的測定が可能な感度を示し、有効に利用された。4.持続的にルジフェラーゼを発現する細胞株の樹立はCHL,Cos細胞について試み、それぞれ6株、2株を得た。これらの細胞株ではCd^<2+>により、ルシフェラーゼ発現の増強(数倍〜10倍以上)が認められた。5.魚類由来培養細胞にも、メタロチオネイン・ルシフェラーゼ融合遺伝子の導入を行い、その発現とCd^<2+>による発現の誘導を検出することが出来た。6.超高感度イメージングシステムを利用するには至らなかった。

研究的目的：引入从萤火虫（Photinus pyralis）中分离的荧光素酶基因到培养的哺乳动物细胞中，以创建自发光细胞系，建立一个可以随时间和连续观察活细胞内观察和记录基因控制的系统。今年的结果：1。修饰了萤火虫可拉二酶基因，以结合中国仓鼠金属硫蛋白基因的启动子区域，并使诱导它成为可能。 2。在将上述基因暂时引入中国汉斯塔衍生的CHL细胞，绿色猴子衍生的COS细胞，小鼠衍生的细胞等之后，然后用CD^<2+>和dexamethersone诱导上述基因。动物物种的差异很大，在Chl中具有CD^<2+>，并且在COS中塞米松，并且能够诱导荧光素酶表达，但是在小鼠细胞中未观察到表达较低，并且未观察到诱导。 3。作为固定装置购买的发光仪显示出灵敏度，几乎可以针对上述材料进行定量测量，浓度约为10^7个细胞，并有效地使用。 4。在CHL和COS细胞上尝试连续地表达可拉二酶的细胞系，分别获得6和2菌株。在这些细胞系中，观察到CD^<2+>增强的荧光素酶表达（几到10次或更多）。 5。将金属硫蛋白 - 卢酸酶融合基因引入到培养的鱼类衍生的细胞中，并且可以检测到其通过Cd^<2+>对表达的表达和诱导。 6。我们无法使用超敏感的成像系统。

项目成果

期刊论文数量（1）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Matsukuma,S.,Nakatsuru,Y,Nakagawa,K.,Utakoji,T.,Sugano,H.,Kataoka,H.,Sekiguchi,M.,Ishikawa,T.: "Enhanced O^6ーmethylguanineーDNAーmethyltransferase activity in transgenic mice containing an integrated E.coli ada repairgene." Mutation Research. 218. 197-206 (

Matsukuma, S.、Nakatsuru, Y、Nakakawa, K.、Utakoji, T.、Sugano, H.、Kataoka, H.、Sekiguchi, M.、Ishikawa, T.：“增强型 O^6－甲基鸟嘌呤－DNA－甲基转移酶含有整合的大肠杆菌 ada 修复基因的转基因小鼠的活性。”突变研究。218. 197-206（