神経突起伸展因子の作用機作に関する研究

神经突生长因子作用机制的研究

• 批准号: 62221016
• 负责人: 三木 直正
• 金额: $ 0.96万
• 依托单位: Kanazawa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Special Project Research
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62221016/
• 关键词: 突起伸展因子; 神経細胞; 突起伸展因子受容体

神経突起伸展因子(NOF)を認識し, これと結合する分子(受容体)は, 筋肉側にも, 神経側にも存在するものと考えられる. そこで今回は, 筋肉側の膜分画に存在し, NOFと結合し, かつNOFの生物活性(突起伸展活性)を阻害する分子について追求したので報告する. ニワトリ砂嚢平滑筋の膜分画を0.5%Nonidet p-40で抽出し, その20万g, 60分の上滑をNP-40抽出液とした. 各種濃度のNOFを培養皿に塗布し, 300μgのNP-40抽出液を加えていくと, NOFの突起伸展活性が抑えられた. また一定量のNOFを培養皿に塗布して, NP-40抽出液を漸次増加していくと, NOFの突起伸展活性は30μg/wellで完全に抑えられた. 一方, ラミニンによる突起伸展作用はNP-40抽出液では抑えられなかった. NP-40抽出液は毛様体ニューロンの生存や, 基壁への細胞の結合に対しては影響を与えなかった. トリプシン処理や熱処理で, HP-40抽出液の活性は消失した. DTT処理では活性の低下が見られS-S結合の関与が示唆された. 骨格筋は筋胃とほぼ同程度の活性が存在したが, 大脳の活性は, 筋肉の約1/6であった. NP-40抽出液の阻害活性をもつ成分がNOFと結合するかどうかを調べるために, リカンドフロッティングを行ったところ, 82KDaの蛋白バンドにNOFと結合することが分った. この蛋白質を各種カラムを用いて部分精製した. この部分精製したサンプルをSDSゲル電気泳動にかけ, ゲルをスライスして活性を調べた所, 82KDaの主バンドにNOFの作用を阻害する活性が存在した. lamininに結合する物質(CSAT antigen)やlaminin受容体が知られているが, これらはlaminin細胞結合ドメインと親和性がある. 我々の82KDaの蛋白質はNOFの細胞結合ドメインではなく, 突起伸展ドメインを認識するようである. 今後, 82KDaの蛋白質の精製を進めると共に, 82KDaの蛋白質に対する抗体を作製し, NOF受容体について検討を進めていく予定である.

NOF is recognized as a binding molecule (receptor), which exists on the muscle side and on the nerve side. In this paper, the existence of NOF and NOF in the membrane of muscle side, the inhibition of NOF's biological activity (protrusion extension activity) and molecular pursuit are reported. 0.5% Nonidet p-40 extract, 200,000 g, 60 min up slide NP-40 extract. NOF at various concentrations was applied to the culture dish, 300μg of NP-40 extract was added to the culture dish, and the protrusion extension activity of NOF was inhibited. When a certain amount of NOF was applied to the culture dish, NP-40 extract was gradually increased, and the activity of NOF protrusion extension was completely inhibited by 30μg/well. One side, Np-40 extract solution, Np-40 extract solution, NP-40 extract solution, NP-40 extract solution for hair growth and survival, the base wall of the cell combination for the impact of the two. The activity of HP-40 extract disappeared after heat treatment. DTT treatment decreased the activity of S-S binding and decreased the activity of S-S binding. The activity of muscle and stomach is about 1/6 of the activity of muscle and stomach. NP-40 extract of the inhibitory activity of the composition of NOF binding, the separation of NOF binding, 82KDa protein binding. The protein is refined by using various kinds of protein. This part of the purification of SDS has been found to be active in the inhibition of NOF activity by 82kDa. laminin binding substance (CSAT antigen) and laminin receptor are known to bind to laminin cells with affinity. The 82KDa protein in the NOF cell binds to the protein, and the protein is known as a protrusion. In the future, the purification of 82KDa protein will be further developed, the production of antibody against 82KDa protein will be further developed, and the NOF receptor will be further developed.