枯草菌tRNA中の微量修飾ヌクレオチドの探索とその化学構造の決定

寻找枯草芽孢杆菌 tRNA 中稍微修饰的核苷酸并确定其化学结构

• 批准号: 63571005
• 负责人: 村尾 捷利
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63571005/
• 关键词: tRNA; 修飾ヌクレオチド; FAB-MASS; LC-MASS; アンチコードン; 微量修飾塩基; 5ーメトキシウリジン

1.tRNAの精製単離。存在量が微量なアミノ酸の画分についてカラムクロマトグラフィ-による精製を重ねた。その結果、Glu、Asp、Ileなどの遺伝コ-ドの少ないものも含めてほとんどすべてのアミノ酸について精製が終了した。例外として、アミノ酸受容活性測定が現時点では困難なTrp、Cysについてはその構造解析を待たなければどの成分が該当するのか確認できない。2.すでにDNAレベルで塩基配列の決定されているアミノ酸のtRNAについてはその配列の正しさが一部の例外を除いて確認できた。すなわち、主要な活性のセリンtRNAではエキストラル-プと呼ばれる部分にある-GGGGU-と報告されている配列が-GGGU-であることを確定した。また現在DNAでは配列が分かっていて微量修飾ヌクレオチドの存在が示唆されているIle(NAU)Leu(NAG)につて解析中である。3.HPLC/質量分析の条件設定。試料を高速液クロマトから直接導入するためには、多少の分離度の悪化を来たしても揮発性の緩衝液を利用しなければならない。また、ヌクレオシド、ヌクレオチドのイオン化の方式としてFAB法が最適であり、その助材となるマトリックス剤の検索も併せて行ったところ、酢酸アルキルアミン緩衝液、またマトリックスとしてはジェタノ-ルアミンが最適であった。4.微量修飾塩基の構造解析。初めに精製やヌクレオチド配列が決定できたセリンtRNAについて存在する修飾塩基の構造解析を行ったところ、予想されていた5-メトキシウリジン(mo^5U)、イソペンテニルアデノシン(i^6A)がそれぞれ分子イオンピ-ク、m/z273、m/z334に検出された。i^6Aはメチルチオ化されていなかった。さらに他のtRNAについても分析を引き続き行っていく予定である。

1. tRNA purification. There are trace amounts of acid in the composition. The results, Glu, Asp, Ile, etc. are as follows: Except for the determination of acid tolerance activity, it is difficult to analyze the structure of Trp and Cys, and to confirm the composition of Trp and Cys. 2. The DNA sequence is determined by the sequence of DNA sequences. The main activity of the tRNA is to determine the content of the tRNA. The presence of DNA is indicated by the presence of Ile(NAU)Leu(NAG). 3. HPLC/Mass Analysis Condition Setting. The sample is introduced directly from the high-speed liquid, and the separation degree is reduced to a certain extent. The FAB method is the most suitable method for the determination of trace amounts. 4. Structural elucidation of micro-modification groups. The structure analysis of the modified base was carried out to determine the initial refinement of the molecular structure of the modified base. It is expected that the 5-mer structure (mo^5U), the 3-mer structure (i^6A) and the molecular structure (m/z273, m/z334) of the modified base will be detected. i^6A The analysis of the tRNA is carried out in a predetermined manner.