急速凍結EXAFS法による金属タンパク質の反応メカニズムの解析

利用快速冷冻EXAFS方法分析金属蛋白的反应机理

• 批准号: 63580216
• 负责人: 西郷 敏
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: Jichi Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1989
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1989 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63580216/
• 关键词: 急速凍結法; EXAFS; X線吸収スペクトル; 反応中間体; 酵素反応; 急速凍結

昨年度開発したクライオスタットの観測部を改良し、試料室の窓と蛍光X線の検出用窓を格段に大きくした。これにより、X線のアラインメントが容易になるとともに、効率の良い測定が可能になった。急速凍結した試料の調整は、実験を繰り返すことによりノウハウを蓄積し、再現性のある方法を確立した。さらに、凍結試料のモニタ-システムの光学系を改良し、得られるスペクトルの質を改良した。この装置により、以下のような測定を行った。反応中間体の安定性を調べるため、西洋ワサビペルオキシダ-ゼの複合体IIを急速凍結し、クライオスタット中でその光学的な反射スペクトルを観測した。液体窒素温度に試料を保つと、過剰な過酸化水素の存在下でも複合体IIは長時間安定で複合体IIIへ移行しなかった。以前の経験では、-160℃の温度で複合体IIは不安定であったので、液体窒素温度に試料を保つことの重要性が確認された。同時に、このモニタ-システムがX線測定中の試料の安定性や放射線損傷を評価する上で有効であることも確かめられた。次に放射光を用いて、シアンを結合したメトミオグロビンを還元する反応について急速凍結を行い、鉄吸収端付近のX線吸収スペクトルを測定した。この反応は、反応途中に中間体が出現する典型的な例である。急速凍結した試料のスペクトルは、室温で液体状態の同じ試料のものと同程度に良質であった。反応直後(10ms)と反応終了後に急速凍結した試料(それぞれA、B)は、反応の進行に由来するスペクトルの特徴を示した。すなわち、BはAに比べ吸収端位置が低エネルギ-側に移動し、軸配位子の結合に由来する吸収帯が消失していた。これは、反応に伴って鉄原子の還元され、シアン配位子が解離することに対応していると解釈される。

Yesterday, the development of a new type of test room, a new type of test room and a new type of X-ray test room was introduced. The X-ray is easy to detect, and the rate is easy to detect. The method of rapid freezing of samples is established. The optical system of frozen sample was improved, and the quality of sample was improved. This device, the following is a measurement. The stability of the reaction intermediate was adjusted, and the optical reflection of the reaction intermediate was measured. Complex II is stable for a long time in the presence of acidified water in the presence of liquid temperature. Complex III is stable for a long time The importance of sample temperature protection for complex II was confirmed. At the same time, the stability and radiation damage of the sample in X-ray measurement are evaluated. Second, the use of radiation, radiation. Typical examples of intermediates appearing in the reaction process include: Rapid freezing of the sample in the same liquid state, room temperature and the same degree of good quality The characteristics of the samples (A, B) that freeze rapidly after inversion (10 ms) and after inversion are shown. The position of B is lower than that of A. The position of B is lower than that of A. The position of A is lower than that of A. The position of B is lower than that of A. In this case, the iron atom is dissociated from the iron atom, and the iron atom is dissociated from the iron atom.