X線吸収スペクトルの時間分解測定による錯体,金属タンパク質の反応過程の解析

通过 X 射线吸收光谱的时间分辨测量分析配合物和金属蛋白的反应过程

基本信息

  • 批准号:
    03231218
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 1.28万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
  • 财政年份:
    1991
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    1991 至 无数据
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

高速反応に伴うX線吸収スペクトルの変化を測定するためには、特別の工夫が必要である。一つの方法は、急速凍結により、反応を停止させ、その後に時間をかけてスペクトルを測定することである。本研究は、従来の経験を基礎に、このような目的のための実用的な装置を開発し、いくつかの測定を行った。西洋わさびペルオキシダ-ゼは、反応の過程でいくつかの中間体が出現する。このうち複合体IIのヘム鉄近傍の講造について、X線吸収スペクトル法による二つの異なる結果が報告されている。急速凍結法により複合体IIを調製し、そのX線吸収スペクトルを測定した。その結果、X線の照射により鉄吸収端の位置が低エネルギ-側に移動し、ヘム鉄が還元を受けることが明らかになった。信頼のおけるデ-タを得るためには、このような還元を抑えなければならない。ラジカルと反応性の高いいくつかの物質について調べたところ、ジメチルスルホキシドがX線による還元を大幅に抑えることが分かった。この物質の共存下で複合体IIの測定を行う予定である。ジペプチドやそのアナロダはインヒビタ-としてサ-モライシンに結合するが、分解されない。さまざまなインヒビタ-と酵素の複合体のX線結晶解析がなされ、相互作用の様子が明らかにされている。結晶講造解析のなされている5種類のインヒビタ-とサ-モライシンの複合体の亜鉛吸収端近傍のX線吸収スペクトルを測定した。インヒビタ-のカルボキシル基のO_<ε1>,カルボニル基のO、ホスホリル基のOが水分子のOに代わって配位する場合には、スペクトルの主ピ-クの低エネルギ-側の肩が単独の酵素に比べて顕著に現れた。今後、これらの知見をもとにして、酵素と基質が反応するときに生ずる中間体のスペクトルを測定、解析する予定である。
High-speed reaction 応に accompanied by う X-ray absorptionation スペ <s:1> ト <s:1> <s:1> change を determination するために, special <s:1> time が necessary である. A つ の way は, rapid freezing に よ り, anti 応 を stop さ せ, そ の を に time after か け て ス ペ ク ト ル を determination す る こ と で あ る. は this study, the 従 の 経 験 を に, こ の よ う な purpose の た め の な device be used を open 発 し, い く つ か の line measurement を っ た. In the west, わさびペ キシダ キシダ キシダ-ゼ する, and the anti-応 <s:1> process で く く く キシダ intermediate が appears する. こ の う ち complex II の ヘ ム iron objects near alongside の speak made に つ い て, X-ray absorption 収 ス ペ ク ト ル method に よ る two つ の different な る results が reports さ れ て い る. Rapid freezing method によ complex IIを modulation を, そ X-ray aspiration スペ ト ト を determination た た. そ の results, X-ray の irradiation に よ り iron objects suction 収 の low position が エ ネ ル ギ - side に mobile し, ヘ ム iron objects が also yuan を the け る こ と が Ming ら か に な っ た. Shin Ryo <s:1> おけるデ-タを るために, <s:1> ような ような, won を or えなければならな えなければならな. ラ ジ カ ル と anti 応 の high い い く つ か の material に つ い て adjustable べ た と こ ろ, ジ メ チ ル ス ル ホ キ シ ド が X-ray に よ る yuan を also sharply に え suppression る こ と が points か っ た. Determination of で complex II で under the coexistence of <s:1> and <s:1> substances を を is う predetermined である. ジ ペ プ チ ド や そ の ア ナ ロ ダ は イ ン ヒ ビ タ - と し て サ - モ ラ イ シ ン に combining す る が, decomposition さ れ な い. Youdaoplaceholder0 ヒビタ ヒビタ-と enzyme <s:1> complex <e:1> X-ray crystallization analysis がなされ interaction <s:1> sample が light ら にされて にされて る る. Crystallization speak built analytic の な さ れ て い る 5 kinds の イ ン ヒ ビ タ - と サ - モ ラ イ シ ン の complex の 亜 lead suction 収 nearly alongside の X-ray absorption 収 ス ペ ク ト ル を determination し た. イ ン ヒ ビ タ - の カ ル ボ キ シ ル base の O_ 1 > < epsilon, カ ル ボ ニ ル の O, ホ ス ホ リ ル base の の O O が water molecules に generation わ っ て ligand す る occasions に は, ス ペ ク ト ル の ピ - Lord ク の low エ ネ ル ギ - side の shoulder が 単 の enzyme に alone than べ て 顕 the に now れ た. In the future, こ れ ら の knowledge を も と に し て, enzyme と matrix が anti 応 す る と き に raw ず る intermediates の ス ペ ク ト ル を determination, parsing す る designated で あ る.

项目成果

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