ミクロボディタンパク質を識別するレセプターの同定と解析

识别微体蛋白的受体的鉴定和分析

• 批准号: 08740628
• 负责人: 林 誠
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Okazaki National Research Institutes
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08740628/
• 关键词: マイクロボディ; グリオキシソーム; ペルオキシソーム; タンパク質輸送; 膜透過; レセプター

高等植物のミクロボディタンパク質には、(1)イソクエン酸リアーゼなどC末端トリペプチド配列が輸送シグナルとして働くタイプ1型と、(2)チオラーゼなどN末端延長配列を持つ前駆体として合成されるタイプ2型が存在する。ミクロボディが生理機能を維持するためには、細胞基質で合成される多くのタンパク質の中から上記の輸送シグナルを持つタンパク質を選別し、オルガネラ内部に輸送する必要がある。このようなタンパク質識別には、輸送シグナルに特異的な結合活性を有するタンパク質がレセプターとして働くと考えられる。そこで本研究では、マイクロボディタンパク質を識別するレセプターの同定を試みた。レセプターを単離する方法として、まずYeast two hybrid systemによる検索を行った。そのために、まずGAL4のDNA結合領域とカボチャ・イソクエン酸リアーゼのC末端からなる融合タンパク質を発現するbait plasmidと、アラビドプシスcDNAライブラリーを含むprey plasmidsを構築した。ついで、両者を同時に酵母へ導入した。これまでに、5×10^5個の形質転換体についてスクリーニングを行ったが、His^+/X-Gal^+を示すものはなく、レセプターcDNAを同定するには至っていない。現在、スクリーニングを続行中である。上記の方法とは全く異なるアプローチとして、ミクロボディタンパク質の輸送機構に欠損を持つアラビドプシス突然変異体の選抜を行った。その結果、ミクロボディの主要代謝系である脂肪酸β酸化系の活性を欠損する突然変異体の単離に成功した。この突然変異体は、細胞基質に前駆体型のチオラーゼを蓄積することから、タイプ2型シグナルを識別するレセプターもしくはその輸送機構に変異を持つと考えられる。現在、変異遺伝子のマッピングを行っている。

The higher plants are characterized by: (1) C-terminal alignment, transport, and (2) N-terminal extension alignment, precursor, and synthesis. In order to maintain physiological function, cell matrix synthesis, multiple substances, transport, selection, and internal transport are necessary. This is the first time that a person has been identified as a person with a specific binding activity. This study is aimed at identifying the identity of the species. The two hybrid systems are designed to meet the needs of the community. The DNA binding domain of GAL4 was constructed by using the bait plasmid and the cDNA fragments containing prey plasmids.ついで、両者を同时に酵母へ导入した。The 5×10^5 morphologic variants were selected from the group consisting of His ^+/X-Gal^+, His^+, and His ^+. Now, you're in the middle of something. The method described above is based on the selection of all possible variations in the quality of the conveying mechanism. As a result, the activity of the main metabolic system of fatty acid beta acidification was impaired, and the isolation of the mutant was successful. The expression of these genes in the cell matrix is different from that in the transport mechanism. Now, you're going to have to change your mind.

项目成果

Kato,A.Hayashi,M.Takeuchi,Y and Nishimura M: "cDNA cloning and expression of a gene for 3-ketoacyl-CoA thiolase,in pumpkin catyledons" Plant Mol. Biol. 31. 843-852 (1996)

Kato，A.Hayashi，M.Takeuchi，Y 和 Nishimura M：“南瓜 Catyledons 中 3-酮脂酰辅酶 A 硫解酶基因的 cDNA 克隆和表达”植物分子。

Hayashi,M.Tsugeki,R.Kondo,M.Mori,H.and Nishimura M.: "Pumpkin hydroxypyruvote reductases with and without a putatire C-terminal signal for targeting to microbodies may be produced by alternative splicing" Plant Mol.Biol.30. 183-189 (1996)

Hayashi,M.Ttsugeki,R.Kondo,M.Mori,H.和 Nishimura M.：“带有或不带有用于靶向微体的 Putatire C 端信号的南瓜羟基丙酮酸还原酶可以通过选择性剪接产生”Plant Mol.Biol。

Kato,A.Hayashi,M.Kondo,M and Nishimura M: "Targeting and processing of a chimeric protein with the amino-terminal presequence of the precursor to glyoxysomal citrate synthase" Plant Cell. 8. 1601-1611 (1996)

Kato,A.Hayashi,M.Kondo,M 和 Nishimura M：“利用乙醛酸柠檬酸合酶前体的氨基末端前序列定位和加工嵌合蛋白”植物细胞。

Mano,S.Hayashi M.Kondo M and Nishimura M.: "cDNA cloning and expression of a gene for isocitrate lyase in pumpkin cotyledons" Plant Cell Physiol. 37. 941-948 (1996)

Mano，S.Hayashi M.Kondo M 和 Nishimura M.：“南瓜子叶中异柠檬酸裂解酶基因的 cDNA 克隆和表达”植物细胞生理学。

Nishimura,M.Hayashi M Kato A Yamaguchi K and Mano S: "Functional transformation of microbodies in higher plant cells" Cell Struct.Funct. 21. 387-393 (1996)

Nishimura，M.Hayashi M Kato A Yamaguchi K 和 Mano S：“高等植物细胞中微体的功能转化”Cell Struct.Funct。