先天性ヒスチジンリッチグリコプロテイン欠乏症の病態生理，遺伝子異常および発症機構

先天性富含组氨酸糖蛋白缺乏症的病理生理学、遗传异常和发病机制

• 批准号: 09671116
• 负责人: 重清 俊雄
• 金额: $ 1.6万
• 依托单位: The University of Tokushima
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1999
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09671116/
• 关键词: 先天性ヒスチジンリッチグリコプロテイン欠乏症; ヒスチジンリッチグリコプロテイン; 遺伝子異常; 血栓症

1993年、我々は先天性ヒスチジンリッチグリコプロテイン(HRG)欠乏症の世界初の家系を報告した。今回は本家系における本症の遺伝子異常を明らかにした。対象は先天性HRG欠乏症の1家系10人と正常対照52人である。発端者のHRG遺伝子の7つのエクソンを個々に増幅し、サブクローニング後、dideoxy法によって塩基配列を決定したところ、第3エクソンにGly^<85>(GGA)→Glu^<85>(GAA)の変化を約半数のクローンに認めた。発端者の残りのエクソンはすべて正常であった。発端者のHRG遺伝子のこの点突然変異によってTaq I認識部位が形成されたので、Taq Iによる切断実験によって家系員と正常対照のHRG遺伝子に発端者と同一の変化があるか否かを検討したが、血漿HRG抗原量の低下した家系員3人は発端者と同一のパターンを示し、正常の家系員6人と正常対照52人はTaq Iで切断されなかった。次に連続PCRによって、(Gly85→Glu)変異を導入したHRGcDNAを作製し、ZMB3ベクターに挿入した。このベクターをリン酸カルシウム法によってBHK細胞に形質導入後、安定発現クローンを得た。puls-chase実験を行い、分泌を調べた結果、正常型HRGは速やかに分泌され、chase4時間後にはほとんどが細胞外に分泌された。これに対して、異変型ではchase時間と共に細胞内のHRG量が減少するものの、細胞外への分泌はほとんど見られず、細胞内で分解されていることが確認された。以上のことから本家系における先天性HRG欠乏症がHRG遺伝子の第3エクソンにおける点突然変異Gly^<85>(GGA)→Glu^<85>(GAA)に由来することが明らかになった。

In 1993, we reported the world's first family of congenital deficiency syndrome (HRG). This is the first time I've ever seen a child who's been diagnosed with a disease. 10 cases of congenital HRG deficiency and 52 cases of normal HRG deficiency were compared. The HRG gene of the developer has 7 different types of protein, and the dioxy method has 7 different types of protein, and the dioxy <85>method has 7 different types of protein<85>. The end of the line is not normal. The HRG gene of the first generation was suddenly changed, and Taq I recognized the site of formation, Taq I, Taq I. The next step is to introduce HRG cDNA into PCR,(Gly85 →Glu), and ZMB3 into PCR. This method was applied to BHK cells after plasmid introduction and stable development. Puls-chase is activated, secretion is regulated, normal HRG is activated, secretion is regulated, chase is activated, extracellular secretion is regulated The changes in HRG levels in the cytoplasm and cytoplasm were confirmed by the decrease in HRG levels in the cytoplasm and cytoplasm. The above is the origin of congenital HRG deficiency and the origin of HRG deficiency is Gly^<85>(GGA)→Glu^ (<85>GAA).

项目成果

Toshio Shigekiyo: "HRG Tokushima:Molecular and Cellular Charaoterization of Histidine-Glycoprotein (HRG)deficiency" Blood. 91・1. 128-133 (1998)

Toshio Shigekiyo：“HRG 德岛：组氨酸糖蛋白（HRG）缺乏症的分子和细胞特征”血液 91・1。