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機能性ＲＮＡリボザイムを用いた点変異高識別型遺伝子治療薬の創製

利用功能性RNA核酶创建点突变敏感基因治疗药物

基本信息

批准号：
13J07758
负责人：
栗山光博
金额：
$ 1.32万
依托单位：
The University of Tokyo (2014)Tohoku University (2013)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

これまでに点変異疾患への根本的治療法が行われてこなかった理由の一つに，変異した点変異疾患遺伝子選択的に遺伝子発現を抑制する技術が確立されていないことが挙げられる．そこで点変異疾患への新規遺伝子治療薬の創製のために，一塩基の差異を識別してRNA鎖を切断する技術（即ち点変異疾患遺伝子選択的発現抑制）の確立を目指した．昨年度，pseudoknot型hammerhead ribozyme（PK-HHRz）は，loop I（基質RNA鎖）及びloop II（リボザム鎖）間で塩基対を形成する事で基質鎖切断活性が大幅に上昇することを見いだした（この新たに形成された塩基対をpseudoknot二重らせんと呼ぶ）．このことより， pseudoknot二重らせんの熱力学的安定性を一塩基の差異で制御する事が出来れば，PK-HHRzの切断活性は一塩基の差異によってon / off制御（switching）されるのではないかと考えた．b-globinの或る点変異疾患を引き起こす点変異遺伝子配列を標的とするPK-HHRzを，上記仮説に基づいて設計し切断活性を調べたところ，PK-HHRzは点変異遺伝子配列選択的な切断活性を示した．また他の点変異疾患を引き起こす点変異遺伝子配列を用いて切断活性試験を行ったところ，一塩基の差異に応答して点変異遺伝子選択的な切断活性を示された．以上の結果より，loop I（基質RNA鎖）とloop II（リボザイム鎖）が形成するpseudoknot二重らせんで一塩基の差異を識別して活性が制御されるリボザイムが創製できるという仮説が検証され，且つ本PK-HHRzの創製指針は一般性があることが明らかとなった．

これまでに point - vision disorders への fundamental treatment line がわれてこなかった reason の a つに, - different した point - traces of different diseases but 伝 son sentaku に伝 son 発 now を inhibit する technology が establish されていないことが挙げられる. そこで point - vision disorders への new rules but 伝 son treatment 薬の created のために, a salt base の differences を recognition して RNA lock を cut する technology (namely ち point - vision disorders but 伝 son sentaku 発 now inhibition) の establish を refers した. Last year, pseudoknot type hammerhead ribozyme (PK-HHRz) youdaoplaceholder7 Loop (RNA) matrix and I び loop II (リボザム lock) between で salt formed を seaborne する matter で lock to cut off the active matrix がに rise sharply することを see いだした (この new たに form された salt base を seaborne pseudoknot double らせんと shout ぶ). このことより, pseudoknot double らせんの thermodynamic stability を a salt base の differences です system initiates a がる things れば, PK - HHRz の cut active は salt base の differences によって on/off suppression (switching) されるのではないかと exam えた. B - globin の or る point - vision disorders を lead き up こす points - different heritage 伝 with sequence を mark とする PK - HHRz を, written 仮 said にづいて design し cut activity を adjustment べたところ, PK - HHRz は points - different heritage 伝 with sequence を sentaku な cut activity in した. また he is の point - vision disorders をき up こす points - different heritage 伝 son matched with column をいて cut activity test line をったところ, a salt base の differences に応 answer して points - different heritage 伝 son sentaku な cut active を shown された. の above results より, loop (lock) matrix RNA と loop II (リボザイム lock) が form する pseudoknot double らせんで a salt base の differences を recognition してが active suppression されるリボザイムが created できるという仮 said が検 card され, And the PK-HHRz pointer created by this document is とが general があるとがとが clear らとなったとなった.