肺癌進展における細胞接着及びAnoikisに関わる新規遺伝子の解析

GeneBに関して、GeneBのノックダウン(KD)により、細胞接着欠失による細胞死anoikisが誘導されることを確認しているが、このGeneBとAnoikis制御との関連を解析するために、細胞表面に存在する接着分子インテグリンに注目した。インテグリンは細胞接着に直接関わり、細胞内キナーゼFAKにシグナルを伝達し、Anoikis抑制に作用する。GeneB-KDにより、細胞接着状態でもFAKリン酸化が低下し、FAK活性の低下が示唆された。またFAKシグナル下流分子のリン酸化も低下していた。これらはGeneBが機能的にインテグリンシグナルに関わり、anoikis制御において非常に重要な役割を果たしていることを示す重要な研究成果である。更に昨年度検討した、CRISPR-Cas9を用いたGeneBノックアウト(KO)の検討を、他の癌細胞株においても施行した。昨年度の結果と同様に、他の癌細胞株においても、やはり著明な増殖抑制が引き起こされ、細胞増殖制御におけるGeneBの重要な役割が示唆された。GeneAに関しては、この分子に結合する分子群の網羅的同定を目的として、Myc-tag付加したGeneA産物を発現するレンチウイルスコンストラクトを作成し、ウイルスを産生した。それを癌細胞株に感染させ、Myc-tag抗体で免疫沈降し、GeneA産物分子に結合し共沈降してくる分子を検索しており、種々実験条件を検討して実験を進めている。

GeneBに関して、GeneBのノックダウン(KD)により、細胞接着欠失による細胞死anoikisが誘導されることを確認しているが、このGeneBとAnoikis制御との関連を解析するために、細胞表面に存在する接着分子インテグリンに注目した。インテグリンは細胞接着に直接関わり、細胞内キナーゼFAKにシグナルを伝達し、Anoikis抑制に作用する。GeneB-KDにより、細胞接着状態でもFAKリン酸化が低下し、FAK活性の低下が示唆された。またFAKシグナル下流分子のリン酸化も低下していた。これらはGeneBが機能的にインテグリンシグナルに関わり、anoikis制御において非常に重要な役割を果たしていることを示す重要な研究成果である。更に昨年度検討した、CRISPR-Cas9を用いたGeneBノックアウト(KO)の検討を、他の癌細胞株においても施行した。昨年度の結果と同様に、他の癌細胞株においても、やはり著明な増殖抑制が引き起こされ、細胞増殖制御におけるGeneBの重要な役割が示唆された。GeneAに関しては、この分子に結合する分子群の網羅的同定を目的として、Myc-tag付加したGeneA産物を発現するレンチウイルスコンストラクトを作成し、ウイルスを産生した。それを癌細胞株に感染させ、Myc-tag抗体で免疫沈降し、GeneA産物分子に結合し共沈降してくる分子を検索しており、種々実験条件を検討して実験を進めている。