To investigate the role and mechanisms of action of HOPX as a regulator of human HSC self-renewal

研究 HOPX 作为人类 HSC 自我更新调节剂的作用和作用机制

• 批准号: 22KJ0751
• 负责人: 栢森 健介
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2023
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2023-03-08 至 2027-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22KJ0751/
• 关键词: HOPX; 白血病幹細胞; 急性骨髄性白血病; AML

急性骨髄性白血病(AML)患者においてHOPXの高発現は予後不良であり、また、HOPXは白血病幹細胞に特異的な発現を示すことが明らかになっている。まず、臍帯血由来の造血前駆細胞(CD34陽性細胞)に対して、CRISPR/Cas9により生じるIndelを利用して、HOPXノックアウトを行った。HOPXをノックアウトした細胞を用いて造血コロニー形成アッセイを行ったところ、初回プレーティングと2回目の連続プレーティングではコロニー数に有意な差は得られなかったが、3回目の連続プレーティングではHOPXをノックアウトした群でコロニー数が有意に低下していた。これらは正常造血においてHOPXがコロニー形成能を維持するのに必要である可能性を示唆していた。また、AML患者由来の細胞において上述の方法でHOPXをノックアウトした後、免疫不全マウス(NSG)へ異種移植を行った。なお、ノックアウト後にHOPXの発現がタンパクレベルで減少していることをウエスタンブロッティングにより確認した。移植6ヶ月後に全骨髄解析を行ったところHOPXノックアウト細胞はマウスへの生着率が有意に上昇していた。HOPXをノックアウトした細胞は白血病芽球のCD34陽性率が低下傾向にあり、一部のサンプルでは顕微鏡上、正常単球様の形態を呈していた。HOPXをノックアウトすると芽球が分化傾向となることから、HOPXはAML細胞の維持に必要である可能性を示唆していた。これらの結果は正常造血およびAML細胞におけるHOPXの役割に関する重要な所見と考えられる。

In patients with acute bone marrow leukemia (AML) に お い て HOPX の after high 発 は now to bad で あ り, ま た, HOPX は leukemia stem cells に specific な 発 を now shown す こ と が Ming ら か に な っ て い る. ま ず, umbilical blood 帯 origin の 駆 before hematopoietic cells (CD34 positive cells) に し seaborne て, CRISPR/Cas9 に よ り raw じ る Indel を using し て, HOPX ノ ッ ク ア ウ ト を line っ た. HOPX を ノ ッ ク ア ウ ト し た cells を using い て hematopoietic コ ロ ニ ー form ア ッ セ イ を line っ た と こ ろ, back to the early プ レ ー テ ィ ン グ と 2 pa2 の even 続 プ レ ー テ ィ ン グ で は コ ロ ニ ー number に intentionally な poor は must ら れ な か っ た が, 3 pa2 の even 続 プ レ ー テ ィ ン グ で は HOPX を ノ ッ ク ア ウ ト し た group で コ ロ ニ ー が Intentionally に lower the て た た た. こ れ ら は normal hematopoiesis に お い て HOPX が コ ロ ニ ー formation can を す る の に necessary で あ を る possibility in stopping し て い た. ま た の cells of the origins, patients with AML に お い て の way above で HOPX を ノ ッ ク ア ウ ト し た, immune insufficiency after マ ウ ス (NSG) へ xenotransplantation を line っ た. After な お, ノ ッ ク ア ウ ト に HOPX の 発 now が タ ン パ ク レ ベ ル で reduce し て い る こ と を ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ に よ り confirm し た. Transplant ヶ six months after に whole bone marrow line analytical を っ た と こ ろ HOPX ノ ッ ク ア ウ ト cells は マ ウ ス へ の with rate rising が intentionally に し て い た. HOPX を ノ ッ ク ア ウ ト し た は leukemia cells gemmule の CD34 positive rate low が tendency に あ り, a の サ ン プ ル で は 顕 micromirror, normal 単 ball on others を is の form し て い た. HOPX を ノ ッ ク ア ウ ト す る と gemmule が differentiation tendency と な る こ と か ら, HOPX は の AML cells に necessary で あ を る possibility in stopping し て い た. The <s:1> れら <s:1> results of <s:1> normal hematopoietic およびAML cells におけるHOPX <e:1> are に related to する. Important な findings と study えられる.