Charakterisierung und Regulation des reduktiven Prolinstoffwechsels im Zuge der Stickland-Reaktion durch anaerobe Bakterien

厌氧菌斯蒂克兰反应中还原性脯氨酸代谢的表征和调控

• 批准号: 5197874
• 负责人: Professor Dr. Andreas Pich
• 金额: --
• 依托单位: Institut für Toxikologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1993-12-31 至 2003-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5197874?language=en
• 关键词: Charakterisierung; und; Regulation; des; reduktiven

Prolin wird in Clostridium sticklandii durch eine Prolin-Reduktase reduktiv zum 5-Aminovalerat gespalten. An der Katalyse sind ein Selenocystein und eine Pyruvylgruppe beteiligt. Die Pyruvylgruppe wird durch posttranslationale Spaltung eines Proproteins gebildet. Die Expression des Prolin-Reduktase-Operons wird duch Prolin induziert. Ein s54-abhängiger Promotor und ein s54-abhängiges Transkriptionsaktivatorprotein (PrdR) sowie das Gen für einen potentiellen Repressor (prdX) wurden stromaufwärts der Strukturgene identifiziert. Die Regulation des Operons und damit die Funktion des Aktivatorproteins bzw. potentiellen Repressors soll in einem zu etablierenden in vivo Testsystem mittels Reportergenfusion in E. coli detailliert untersucht werden. Zudem ist geplant, das PrdR-Protein überzuexprimieren, um in vitro-Analysen zu seiner Funktion durchführen zu können. Weiterhin ist geplant, die katalytisch wichtige Domäne der Prolin-Reduktase, die Spaltstelle des Proproteins auf ihre Funktion hin zu untersuchen. Dazu soll versucht werden, aktive Prolin-Reduktase in E. coli zu exprimieren und gerichtet Mutationen im Enzym einzuführen, die auf ihren katalytischen Effekt untersucht werden sollen.

通过脯氨酸还原酶还原5-氨基戊酸，可在斯氏梭菌中产生脯氨酸。在催化剂中有硒代半胱氨酸和丙酮酸基团。Pyruvylgruppe将通过翻译后Spaltung产生前蛋白。脯氨酸还原酶操纵子的表达可诱导脯氨酸。一种s54-abhängiger Promotor和一种s54-abhängiges Transskriptionsaktivatorprotein（PrdR）sowie das Gen für einen potentiellen Repressor（prdX）wurden stromaufwärts der Strukturgene identifiziert.操纵子的调节和激活蛋白的功能。potentielen抑制子soll in einem zu etablierenden in vivo检测系统mittels Reportergenfusion in E. coli detailliert untersucht韦尔登。因此，PrdR-蛋白的体外表达，在体外进行功能分析。此外，脯氨酸还原酶的催化作用，前蛋白的空间结构对其功能有重要影响。结果表明，E.大肠埃希菌在酶的作用下发生突变，其催化效应可由韦尔登引起。