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ヒト乳癌遺伝子の分離同定と癌タンパク質の解析

人类乳腺癌基因的分离鉴定及癌蛋白分析

基本信息

批准号：
60015098
负责人：
大野典也
金额：
$ 1.79万
依托单位：
Jikei University School of Medicine
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1985
资助国家：
日本
起止时间：
1985 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

〔研究目的〕本研究は、最近我々の研究室で、ヒト乳癌から新らしい方法に依り第二代までのトランスホーマントDNAの分離に成功したので、この遺伝子の分離・同定を試みる。さらにこの乳癌遺伝子の性質を明らかにするとして、癌遺伝子の発現の結果あらたに出現して来る蛋白質に対するモノクローナル抗体を作製して、乳癌の発症の機構を明らかにしようとするものである。〔本年度研究結果〕1)初代コ・トランスフェクション細胞の腫瘍形成、ヒト乳癌細胞よりのDNAとネオマイシン(G418)耐性遺伝子DNAとをコ・トランスフェクションの結果形質導入し薬剤存在下で増殖可能細胞のみを集めた。2)5×【10^6】の形質導入細胞をヌードマウス皮下に移植した結果、35日〜49日目に腫瘍形成が確認された。この細胞について制限酵素EcoR1で切断ブロット・ハイブリダイゼーション法でAlu+KpnをプローブとしてヒトDNAの存在を確認した。3)第二代コ・トランスフェクション、初代トランスホーム細胞よりDNAを得て再びトランスフェクションを試み増殖して来た細胞を5×【10^6】ヌードマウス皮下に移植した結果14日〜21日と初代トランスホーム細胞と比較して2倍以上の早さで腫瘍の増殖を確認した。この第2代トランスホーマント細胞からDNAを得て解析した結果ヒト由来であることが明らかになった。4)これをラムダ-ファージgtWESに組み込んでクローニングに成功した。その大きさは全体で9kbであった。5)このクローン化した新しいヒト乳癌由来の癌遺伝子と既存の癌遺伝子との異同について検討したところ、ras family,myc,fos,sisとは相同性を示さなかった。目下さらにその詳細を明らかにするべく検討中である。

[Objective] In this study, we have recently developed a new method for isolation of breast cancer DNA based on the second generation of DNA. The nature of the breast cancer gene has been clarified, and the results of the development of the cancer gene have been revealed. The mechanisms of breast cancer development have been clarified. [Results of this year's study] 1) Tumor formation in primary breast cancer cells, DNA development in primary breast cancer cells (G418), DNA development in primary breast cancer cells 2)5× [10^6] plasmid introduced cells were transplanted subcutaneously, and tumor formation was confirmed from 35 to 49 days. The presence of the restriction enzyme EcoR1 in the cell was confirmed by Alu+Kpn. 3)Subcutaneous transplantation of the second generation cells and the first generation cells was confirmed by DNA amplification and 5× [10^6] cells. The 2nd generation of DNA analysis 4) This is the first time that the GTWES has been successfully organized.その大きさは全体で9kbであった。5) The similarities and differences between the origin of breast cancer and existing cancer genes are discussed in this paper. The similarities and differences between ras family,myc,fos,sis are shown in this paper. The following is a summary of the results.