遺伝子工学によるプロラクチン受容体の構造解析及び生理作用発現機構
基因工程催乳素受体结构分析及生理作用表达机制
基本信息
- 批准号:61560296
- 负责人:
- 金额:$ 1.28万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
- 财政年份:1986
- 资助国家:日本
- 起止时间:1986 至 无数据
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
ウサギの乳腺のミクロゾームに含まれているプロラチン受容体を界面活性剤(Chaps)を用いて可溶化した。この受容体の構造をゲルロ過・超遠心分折・イオン交換クロマト・電気泳動により解折した。プロラクチンと結合する蛋白に二種類あり、それぞれは独立して存在し、等電点も分子量も異なっていた。分子量83,000の受容体は分子量37,000の受容体に比較して約2.2倍多く存在していた。それぞれの精製にスーパーローズ12のゲルロ過が非常に有効であることを明らかにした。もう一段階クロマトフォーカシングで精製した後アフィニテークロマトを行なうと、ほぼ完全に精製される目度がたった。2.000倍に精製したプロラクチン受容体を抗原としてマウスを兎疫し脾臓細胞とミエローマ細胞を融合して、四種類のモノクローナル抗体を得た。いづれの抗体も分子量約15.000の1gGに属し、サブクラスは1gG1と1gG2bであった。この抗体は、受容体に結合してプロラクチンの結合を完全に阻止した。標識した抗体を使って可容化したプロラクチン受容体の性質を調べることは出来ない。そこで可容化した受容体をニトロセルロース膜に固定して用いた。ニトロセルロース膜に固定化された受容体は、ホルモンとの特異性・プロラクチンとの親和性に何の変化もなかった。抗体は、【10^(-9)】Mから【10^(-7)】Mの間で用量反応を示し、高い親和性を持っていた。【10^(-6)】Mで結合は飽和した。この用量反応曲線を用いてスカッチャードプロットにより更に解析を行なった。標識プロラクチン及び標識モノクローナル抗体を用いても、量をかえた非標識モノクローナル抗体により典型的な二相性の反応を示していた。この結果は、モノクロナール抗体を用いても二種類の異なるプロラクチン結合部位が存在することを示しており、生化学的に分析した結果と一致していた。
The acceptor has an interfacial activity (Chaps), which is soluble. The capacitive body is required to perform an electrophoretic test. The heart is divided into two parts. The molecular weight of two kinds of protein, the two kinds of protein, the molecular weight of the protein, the molecular weight of the isoelectric point, the molecular weight of the protein, the molecular weight of the protein, the molecular weight and the molecular weight of the protein. Molecular weight 83000 "capacitor" molecular weight 37000 "capacitor is about 2.2 times higher than that of the acceptor. It is very important to know that there is a lot of information about the 12-year-old situation. In the first place, you know, you know, your eyes. 2.000 times higher than that of the normal control group, the antigen of the receptor antigen was detected, the spleen cells were infected, the cells were fused, and the antibodies were obtained. The molecular weight of the antibody is about 15.000 1gG, and the molecular weight of the antibody is 1gG1 1gG2b. The combination of antibody antibody, receptor antibody and receptor antibody can completely block the antibody. The tag "antibody" makes it possible for the recipient to become capacitive. The capacitive membrane is used to fix the capacitive body. The immobilization of the membrane, the immobilization of the capacitor, the characteristic of the capacitor, the immobilization of the membrane and the immobilization of the membrane. The dosage of antibody, [10 ^ (- 9)] M, [10 ^ (- 7)] M was negative, high and sexual. [10 ^ (- 6)] M combines information and information. The amount of money used to reverse the curve is different from that of the line. The typical "biphasic" is shown in the typical "biphasic" in the case of the typical biphasic antibody. The results showed that the combination of antibody and antibody existed in the combination of antibody and antibody, and the results of biochemical analysis were consistent with each other.
项目成果
期刊论文数量(5)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
佐藤裕保: Journal of Biochemistry. 99. 1639-1643 (1986)
佐藤博康:生物化学杂志。99。1639-1643(1986)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
川村一男: Journal of Biochemistry. 101. 103-110 (1987)
河村一夫:生物化学杂志。101。103-110(1987)
- DOI:
- 发表时间:
- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
酒井仙吉: Biochemical Journal. 237. 647-653 (1986)
酒井千吉:生化杂志。237. 647-653 (1986)
- DOI:
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- 期刊:
- 影响因子:0
- 作者:
- 通讯作者:
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