サルコイド肉芽腫形成に関する研究-肺胞マクロファージの分化の分析を中心として

结节肉芽肿形成研究——重点分析肺泡巨噬细胞分化

• 批准号: 61570301
• 负责人: 四元 秀毅
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1986
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1986 至 1987
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-61570301/
• 关键词: 肺胞マクロファージ; 分化; サルコイドーシス; アンジオテンツン変換酵素; ヴィタミン【D_3】; アンジオテンシン変換酵素

原因不明の類上皮細胞肉芽腫性疾患であるサルコイドーツス発症機転の検討の為に, 本症の肺病変と関連の深い肺胞マクロファージ(AM)の分化の分析を, アンジオテンツン変換酵素(ACE)を生化学的指標として行った. 従来, AMのACE活性の測定は破砕した細胞について行われたが, 我々はアンジオテンツンI(AI)を基質として, 産生するアンジオテンツンII(AII)量を特異的なRIA法で測定する微量測定法を用い, 同細胞が培養皿に付着した生細胞の状態でそのACE活性を測定することができた. 本法により測定したヒトAMのACE活性は218±106pg AII/20min/10^5cells(n=22)であったが, これを喫煙者と非喫煙者とに分けると, 前者では246±119pg AII/20min/10^5cells(n=14)で, 一方後者では, 160±50pgAII/20min/10^5cells (n=8)と喫煙者のAMは非喫煙者のそれより高いACE活性を有しており, 喫煙がAMの分化を促進することが示唆された. また, 本法はACE活性を生細胞について測定することなどから, AI→AIIの変換が, 血管内皮細胞の場合と同様に, AMでも細胞膜表面で行われることを示唆している. なお, 今回はサルコイドーツス症例のAMについては十分な検討を行い得ず, 今後の課題として残った. 一方ビタミンD_3による刺戟では, AMは互いに融合し一部巨細胞化する傾向が示されたが, 定量化できる成績には至らなかった.つぎに, 免疫組織学的方法として, ヒト肺からACEを精製し, これに対するモノクローン抗体を用いた検討を目指したが, 同酵素の精製過程で種々の問題点が明らかになった. 本酵素の精製は従来肺ホモジネートから得られる膜分画を界面活性剤で可溶化して行ってきたが, 回収率改善の為に界面活性剤で得られる膜分画可溶化部分をさらにトリプシンで処理し, より高い回収率を得ることができた. 現在, 本法で得られるACEの生化学的性質を検討中であるが, 効率的に得られる本酵素を用いて純度の高い抗体を作製し, これによりAMの分化の検討をさらに進めたい.

Analysis of the differentiation of the underlying lung cancer (AM) in epithelioid granulomatous diseases of unknown origin, and biochemical markers of ACE. In the past, ACE activity of AM was measured by microassay method in culture dish with different cells. ACE activity of AM was measured by microassay method in culture dish with different cells. ACE activity of AM was 218±106pg AII/20min/10^5 cells (n=22), and ACE activity of AM was 246±119pg AII/20min/10^5 cells (n=14) and 160±50 pg AII/20 min/10^5 cells (n=8), respectively. The differentiation of AM and smoke is promoted. This method was used to determine ACE activity in endothelial cells. In the same way, AM activity was measured on the surface of endothelial cells. This is the first time that we've had a problem with this problem. A side of the D_3, a side In addition, the method of immunohistology and purification of ACE in lung tissue are discussed in detail. The enzyme is purified from the soluble part of the membrane and the soluble part of the membrane is treated with high recovery rate. Now, this method has been used to investigate the biochemical properties of ACE and its efficiency. The enzyme has been prepared with high purity antibody, and the differentiation of ACE has been investigated.

项目成果

Takeuchi, Koichiro: Journal of Biochemistry.

竹内晃一郎：《生物化学杂志》。

Yukihiko Sugiyama: Respiration.

杉山幸彦：呼吸。

Kohichiro Takeuchi: Journal of Biochemistry.

竹内晃一郎：生物化学杂志。

Sugiyama, Yukihiko: Respiration.

杉山幸彦：呼吸。