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アンジオテンシン変換酵素のアミノ酸配列、アイソザイムの検討とその医学的応用

血管紧张素转换酶的氨基酸序列、同工酶的研究及其医药应用

基本信息

批准号：
63570284
负责人：
四元秀毅
金额：
$ 1.34万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至 1989
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト肺(180gr)を出発材料とし、比活性105units/mgタンパクの高比活性を有し、sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis(SDS-PAGE)上、均一な本酵素0.3mgが得られた。SDS-PAGEでの分子量は170,000と計算され、クロマトフォカッシング法による等電点は4.8であった。精製酵素のアミノ酸配列をアミノ酸分析機により検索したところ、アミノ基末端からの配列は(NH_2)-X-XーPro-Gly-Leu-Glu-Pro-Gly-X-Phe-Ser-Ala-Arg-Glu-Ala-Gly-Alaと、17個中14個のアミノ酸配列を決定することができた。このアミノ酸配列はすでに報告されているウシ、ウサギ肺、ブタ、ウシ腎由来のアンジオテンシン変換酵素のN末アミノ酸配列と高い相同性を有していたが、ヒト腎由来の同酵素のそれとは異なるものであった。精製された本酵素を抗原としてBALB/cマウスを感作し、脾細胞を骨髄腫細胞と細胞融合し、8回のクロ-ニングにて細胞株を確立した。BALB/cマウス腹水より硫安分画、ゲルろ過法にて単クロ-ン抗体を精製した。得られた抗体はIgM抗体で、Western blotにて分子量約170,000のアンジオテンシン変換酵素に相当する部位に陽性バンドを認識した。同抗体を用いた蛍光抗体間接法にて、ヒト肺血管内皮細胞、腎糸球体毛細管内皮細胞、尿細管上皮細胞、精巣精細管上皮細胞が染色された。現在、これらの組織間での抗原性の差異を検討中である。

The specific activity of the enzyme was 105units/mg. The activity of the enzyme was 105units/mg. The activity of the enzyme was 0.3 mg. SDS-PAGE molecular weight is 170,000. Isoelectric point is 4.8. The acid sequence of purified enzyme was determined by acid analyzer. The acid sequence of purified enzyme was (NH_2)-X-Pro-Gly-Leu-Glu-Pro-Gly-X-Phe-Ser-Ala-Arg-Glu-Ala-Gly-Ala, and 14 of 17 acid sequences were determined by acid analyzer. The sequence of these enzymes is reported to be different from those of the corresponding enzymes. The purified enzyme was used to detect the presence of BALB/c, spleen cells, osteoma cells, and cell fusion. BALB/c antibody purification The IgM antibody was identified by Western blot and the corresponding site of the enzyme was identified. The same antibody was used to stain pulmonary vascular endothelial cells, glomerular capillary endothelial cells, urinary tubule epithelial cells and seminiferous tubule epithelial cells. Now, the differences in antigenicity between tissues are discussed.