膜タンパク質Na^+, K^+-ATPaseの基本構造体とその2量体の機能的差異

膜蛋白Na^+、K^+-ATPase及其二聚体基本结构的功能差异

• 批准号: 62580131
• 负责人: 林 雄太郎
• 金额: $ 1.02万
• 依托单位: Kyorin University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1987
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1987 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-62580131/
• 关键词: Na^+, K^+-ATPase; 可溶化膜タンパク質; HPLC; 解離会合平衡; 膜タンパク質; 低角レーザー光散乱; カチオン能動輸送

Na^+, K^+-ATPase(酵素)の基本構造体(αβ-プロトマー, P)とその2量体((αβ)_2-ダイプロトマー, D)について比較し, 以下の結果が得られた.(1)ATPase活性について-C_<12>E_8と活性発現に必要なリガンド(ATP, Na^+, K^+, Mg^<2+>)の他に, 精製ホスファチジルセリン(60μg/ml)を含んだ溶出緩衝液でHPLCカラム(TSK-gel G3000SW)を平衡化し, そこに種々の量の可溶化酵素を負荷して, クロマトグラフィーを行い, 溶出する蛋白質成分の分子量とATPase活性を同時に測定した. 分子量は低角レーザー光散乱法, 活性は溶出液中のPi濃度測定で行った. 溶出した成分は, 負荷量に依らず常に1つで, その分子量は高負荷量時の22万から, 低負荷量時の15.8万へと連続的に変化した. これは, 可溶化酵素は2P【.dblbarw.】Dの解離・会合平衡系にあり, 低蛋白濃度でP状態で, 高濃度ではPとDの混合状態となることを示した. 一方, ATPase活性値は, 蛋白質負荷量に依存せず一定で, 膜結合型酵素の64%を示した. 従って, DとPの構造体間には, ATPase活性に差がないと結論した.(2)ATP結合-0.1M NaClと10μM^<14>C-ATPを含む溶出緩衝液を用い, 上記のカラムを使ったHummel-Dreyerの方法でATPの結合を測定した. Dに大して1.5で, Pに1.3molATP/1.5×10^5g蛋白質の結合量で, 有意な差はなかった.(3)カチオン結合-同じ手法で^<204>Tl^+の結合を測定した. DとPへの結合量は, 4μMTl^+でそれぞれ1.1と0, 16μMTl^+で1.9と1.2mol/1.5×10^5g蛋白質であった. DとP間に, Tl^+に対する親和性の差が認められた. 以上の結果は, PとDの間には, Tl^+結合に対する親和性以外に差は認められず, Pが機能の最小構造単位であることを示した. しかし, (1)で得られた解離曲線の蛋白質濃度依存性は, 膜ではD以上のオリゴマー構造で存在することを示した.

Na ^ +, K ^ +-ATPase (enzyme) basic building blocks (α β) basic building blocks (P) measuring 2 volumes ((α β) _ 2). The following results show good results. (1) ATPase activity measurement-ATPase activity (ATP, Na ^ +, K ^ +, mg & lt;2+&gt). (60 μ g

项目成果

Hayashi, Yutaro 他: "Perspectives of Biological Energy Transduction" Academic Press, 454 (1987)

Hayashi、Yutaro 等：《生物能量转换的观点》学术出版社，454 (1987)

林雄太郎 他: "続生化学実験講座(第2巻)タンパク質の化学(5)" 東京化学同人, 432 (1987)

林裕太郎等：《生物化学实验教程（第2卷）蛋白质化学（5）》东京化学同人，432（1987）

Takagi, Toshio: J. Biochem.101. 805-811 (1987)

高木敏夫：J.Biochem.101。

Hayashi, Yutaro: J. Biol. Chem.

林裕太郎：J. Biol。

林雄太郎: 生化学. 59. 688 (1987)

林裕太郎：生物化学 59. 688 (1987)