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酵母細胞の増殖, 特にG1期よりS期への移行に関する遺伝子群の研究

酵母细胞生长尤其是G1期向S期转变相关基因的研究

基本信息

批准号：
62615522
负责人：
菊地淑子
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Toho University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

酵母サッカロミセス・セレビシェは真核生物にもかかわらず大腸菌と同程度の分子遺伝学的手法が駆使でき, 真核生物のモデルケースとなっている. 細胞増殖という最も基本的研究テーマに対し, 有効な材料といえる. 本研究では, ミニ染色体のコピー数調節を利用して単離された温度感受性株の相補テストを行い, 10種類以上のグループに分類された. そのうち, GI期よりS期への移行がブロックされたと考えられるts46株について解析した.1.形態変化: ts46株を26°Cで増殖させ, 36°Cにシフトアップして形態観察すると, 大きな芽を出して止まっている細胞が多かった. ミトコンドリアを脱落させたρ°株を用いて, DAPI蛍光染色すると, 大部分の核は母細胞にとどまっていた.2.DNA合成:ジフェニルアミン法によりDNA合成能を調べたところ, 温度シフト後のDNA合成増加は, 200分後で18%しかなかった. 26°Cのコントロールでは, 280%の増加であった.3.遺伝子クローニング:YEp24をベクターとする遺伝子バンクよりts性を相補するプラスミドを単離し, 必須領域を決定した.4.YIp型ベクターにつなぎ, 相同組み換えにより染色体にintegrateさせた後, ランダムスポアー法を行ったところ, 5%がtsであった. 連鎖を示したことから, tsを相補した遺伝子そのものをクローンしたと考えられる.5.mRNAの検出:必須領域をプローブとして, 全RNAのノザンハイブリダイゼーションを行い, 2.5kbに強いバンドを検出した.6.OFAGEによるマッピング:OFAGEシステムにより分離した染色体に, 必須領域をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行い, 染色体7番に由来することが判った. 今後は, DNA合成のより詳細な実験, 細胞周期におけるexecution pointの決定, 遺伝子一次構造の決定などを行い, 遺伝子産物の細胞増殖における役割について研究する.

Yeast サッカロミセス・セレビシェは eukaryote にもかかわらず coliform bacteria and the same degree of molecular genetics techniques are used to make でき, Eukaryotes are the most basic research on cell proliferation and effective materials. This research is onミニChromosome number regulation をUtilization して単利されたTemperature-sensitive strain のphase complement テストを行い, more than 10 kinds of のグループにclassification された.そのうち, GI stage よりS stage への动がブロックされたと考えられるts46 strain についてanalytic した.1. Morphological change: The ts46 strain can be grown at 26°C, and can be grown at 36°C. The large buds are out of the buds and the cells are が多かった. Most of the nucleated mother cells are にとどまっていた.2.DNA synthesis: ジフェニアミン法によりDNA synthesis can be adjusted べたところ, DNA synthesis increases after the temperature is high, After 200 minutes, the temperature is 18%. The temperature is 26°C, 280%のincreasedであった.3.缝子クローニング:YEp24をベクターとする伝子バンクよりts性を相 complementするプラスミドを単利し, Necessary fields are decided. 4.YIp-type ベクターにつなぎ, after the same group of chromosomes are changed and integrated,ランダムスポアー法を行ったところ, 5%がtsであった.chainをshowしたことから, tsをphase complement した伝子そのものをクローンしたと考えられる.5.mRNAの検出: Required field をプローブとして, All RNA のノザンハイブリダイゼーションを行い, 2.5kbに强いバンドを検出した.6.OFAGEによるマッピング:OFAGEシステムによりisolation chromosomeに, Necessary field of をプローブとしてサザンハイブリダイゼーションを行い, The origin of chromosome 7 times is judged by った. From now on, Details of DNA synthesis, The execution point of the cell cycle is determined, the determination of the primary structure of the duct is determined, and the cell proliferation of the duct product is determined.