Die Rolle einer Halogenase und einer "Nicht-Häm-Haloperoxidase" in der Biosynthese des Glykopeptid-Antibiotikums Balhimycin

卤化酶和“非血红素卤过氧化物酶”在糖肽抗生素巴希霉素生物合成中的作用

• 批准号: 5225008
• 负责人: Professor Dr. Wolfgang Wohlleben
• 金额: --
• 依托单位: Lehrstuhl für Mikrobiologie / Biotechnologie
• 依托单位国家: 德国
• 项目类别: Research Grants
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 德国
• 起止时间: 1998-12-31 至 2005-12-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://gepris.dfg.de/gepris/projekt/5225008?language=en
• 关键词: Die; Rolle; einer; Halogenase; und

Die Funktion von NADH-abhängigen Halogenasen und "Nicht-HämHaloperoxidasen" soll anhand der Biosynthese des zweifach chlorierten Glykopeptid-Antibiotikums Balhimycin analysiert werden. Im Balhimycin-Biosynthesegencluster von A. mediterranei konnten wir erstmals sowohl ein Gen für eine NADH-abhängige Halogenase (bhA) als auch ein Gen für eine "Nicht-Häm-Haloperoxidase" (bhp) identifizieren. Durch Genunterbrechungs-Mutagenesen konnte gezeigt werden, daß ausschließlich die Halogenase BhaA für die Chlorierung von Balhimycin verantwortlich ist. Zuerst soll im vorliegenden Projekt die genaue Funktion des bhaA-Gens durch "in frame" Deletion aufgeklärt und die Substrat-/Cosubstratspezifität von BhaA durch Überexpressionsexperimente ermittelt werden. Da das "Nicht-Häm-Haloperoxidase"-ähnliche Gen bhp nicht an der Chlorierung von Balhimycin beteiligt ist, soll auch seine Funktion durch Mutationsanalysen, Überexpression und den Versuch der heterologen Komplementation der bhp-Mutante mit Hilfe anderer "Nicht-Häm-Haloperoxidasen" aus Streptomyceten ermittelt werden. Die Operonstruktur beider Gene und der Zeitpunkt der Expression soll durch RNA-Techniken bestimmt werden. Der Vergleich der Ergebnisse soll die Klärung der unterschiedlichen Funktion von Halogenasen und "Nicht-Häm-Haloperoxidasen" ermöglichen.

韦尔登的两种含氯糖肽抗生素的生物合成对NADH-抗卤酶和“非卤过氧化物酶”的作用Balhimycin生物合成簇A.我们首先确定了一种用于鉴定NADH-脱卤酶（bhA）的基因，也确定了一种用于鉴定“非卤代过氧化物酶”（bhp）的基因。因此，诱变剂可用于韦尔登，使用于巴希米霉素氯化物的卤代酶BhaA稳定。Zuerst soll im vorliegenden Projekt die genaue Funktion des bhaA-Gens durch“in frame”Deletion aufgeklärt und die Substrat-/Cosubstratspezifität von BhaA durch Überexpressionsexperimente ermittelt韦尔登.由于“非卤代过氧化物酶”基因bhp不能与Balhimycin结合，因此也可以通过突变分析，表达和验证bhp突变体与链霉菌“非卤代过氧化物酶”的异源互补作用。基因操纵结构和表达的时间点可以通过RNA技术进行韦尔登。Der Vergleich der Ergebnisse soll die Klärung der unterschedlichen Funktion von Halogenasen und“Nicht-Häm-Halperoxidasen”ermöglichen.