Regulation des vesikulären Transportes in dem endocytotischen Recycling-Weg

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In eukaryontischen Zellen erfolgt die Endocytose und das Recycling von Rezeptoren entlang kinetisch und morphologisch distinkter Stationen, den Sorting- und Recycling-Endosomen. Da diese Kompartimente aufgrund fehlender Marker und geeigneter Trennmethoden bisher nicht aufgereinigt werden konnten, sind sie in biochemischer und funktioneller Hinsicht noch kaum charakterisiert: Sind die Funktionen "Sorting" und "Recycling" in Domänen innerhalb einer Organelle organisiert oder in separaten Kompartimenten? Wie unterscheiden sie sich in ihrer molekularen Zusammensetzung? Welches sind die Faktoren und Mechanismen, die Spezifität und Kinetik des Transportes entlang des Recyclingweges regulieren? Der hier verfolgte methodische Ansatz zur Klärung dieser Fragen ist die Analyse außerhalb des komplexen Systems Zelle: Die Organellen des Rezeptor-Recyclingweges werden über die Marker Rab5 und Rab11 spezifisch immunisoliert und der Transportweg in vitro rekonstituiert. Untersucht werden soll die Funktion potentieller endosomaler Regulatoren, wie Rab-GTPasen und SNARE-Proteine, aber auch die Rolle des Cytoskeletts im endocytotischen Recyclingweg. Es sollen außerdem die bei den verschiedenen Transportschritten aus dem Cytosol spezifisch an die Membran rekrutierten Faktoren identifiziert werden.