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遺伝子工学的手法によるBGMV変異株の作製とその複製

利用基因工程方法创建BGMV突变株及其复制

基本信息

批准号：
63560049
负责人：
池上正人
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Tokyo University of Agriculture
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1本鎖(ss)DNAウイルスであるBGMVゲノムは2種類のDNA(1と2)からなる。我々はすでにBGMVssDNAの複製型2本鎖(ds)DNA1と2の全域をそれぞれ別々にPBR322のClaIおよびHinaIII部位にクローニングした。また、BGMVdsDNAの全塩基配列からdsDNA1には6個、dsDNA2には2個のオープンリーディングフレーム(ORF)が存在する。しかしながら、それぞれのORFの機能については全く知られていない。そこで今年度はそれぞれのORFの一部欠失変異体を作製し、その変異体の植物体内での複製の有無を調べることにより、各ORFの複製における重要性の度合を明らかにした。BGMV DNAの一部欠失変異体の作製を行うために、まずBGMVdsDNAの塩基配列から、BGMVdsDNAのORFを1個所切断する制限酵素を検索したところ、AflIIはBGMVdsDNA1のORFIRI、BglIIはBGMVdsDNA1のORFILIおよびdsDNA2のORF2L1、KpmIはBGMV DNAのORFIL2とIL3を切断することがわかった。したがって、一部欠失変異体の作製には、これらの制限酵素のいずれかで切断し、生じた付着末端をS1ヌクレアーゼで処理し、平滑末端ライゲーションを行って作製した。このようにして作製した一部欠失変異体をインゲンに接種した。葉内でのDNAの増殖の有無は、dCTP〔α-^<32>P〕で標識したクローン化BGMVdsDNAをプローブとして、接種葉から抽出した全核酸とのドットブロットハイブリダイゼーション法により調べた。その結果、BGMVdsDNAのORFILI、IL2、IL3、2L1はBGMVdsDNAの複製にとって極めて重要であることがわかった。しかしながら、ORFIR1の一部欠失変異体はその欠失にもかかわらず、複製可能なことがわかった。さらに、ORFIR1を約400塩基欠失しても複製可能であった。今後、ORFIR1に外来遺伝子を導入し、BGMVdsDNAのベクター化の研究を進めたい。

1. The DNA of this lock (ss) is divided into two types: DNA of 1 type and DNA of 2 type. The whole domain of BGMV ssDNA 1 and 2 is divided into two parts: PBR322 and Hina III. The total base alignment of BGMVdsDNA is 6 in dsDNA1 and 2 in dsDNA2. The function of ORF is to know everything. The importance of ORF replication in plants is also discussed. BGMV DNA has a partial deletion in the gene sequence, BGMVdsDNA ORF has a partial deletion in the restriction enzyme sequence, AflII has ORFIRI in BGMVdsDNA 1, BglII has ORFILI in BGMVdsDNA 1 and ORFIL in dsDNA2, KpmI has ORFIL in BGMV DNA 2 and IL3. A part of the process is incomplete, and the control enzyme is cut off, and the production end is processed, and the control end is smoothed. A part of the problem is that the virus is not present. The DNA in the leaves was amplified with or without dCTP [α-^<32>P], and the DNA in the leaves was extracted from the leaves. BGMVdsDNA ORFILI, IL2, IL3, 2L1 BGMVdsDNA replication is very important ORFIR1 is partially missing, partially missing, partially duplicated. ORFIR1 is approximately 400 times less likely to replicate. In the future, ORFIR1 gene introduction, BGMVdsDNA research and development progress