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ハイブリッド法を用いた脳におけるNa,K-ATPaseアイソザイム発現の研究

混合法研究脑内Na,K-ATP酶同工酶表达

基本信息

批准号：
63570027
负责人：
佐々木宏
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

Na,K-ATPaseは、あらゆる高等動物細胞の形質膜に存在し、Na^+イオンとK^+イオンの能動輸送をになう酵素であり、2つのサブユニットから成る。即ち触媒作用をもつαサブユニットと、機能の不明な糖タンパクであるβサブユニットである。最近、cDNAクローニング法により、ラット脳にはαサブユニットが3種類あることが見出された(α_1、α_2、α_3型)。α_1サブユニットは、ほとんどあらゆる組織中に存在するけれども、α┣D22とα┣D23┫D2サブユニットは脳に特異的である。そこで本研究おいて、我々はラット大脳皮質において、ニューロンとグリア細胞のうちいずれの細胞が、α┣D22┫D2あるいはα┣D23┫D2サブユニットを発現しているのか、ハイブリッド法を使って調べた。実験動物には、S-D系成熟ラット雄を用いた。4%パラホルム固定液でラットを潅流固定後、大脳皮質の凍結切片(厚さ8μm)を作製した。cDNAプローブとして、既に得られているα┣D22┫D2およびα┣D23┫D2サブユニットをコードするcDNAを制限酵素で切断し、3'-非翻訳領域のみを含む断片を┣D135┫D1Sでアイソトープラベルしたものを使用した。スライドグラス上に貼付された切片を、HCl、およびNaCl-Nacitrate液を通した後、pronase処理を行なった。さらにglycine、 paraformaldehyde処理を切片に施し、空気乾燥させた。次に切片をプローブ液とハイブリダイズさせた(37℃24時間)。ハイブリダイズ後、formide液で十分切片を洗浄後、脱水ー空気乾燥した。最後に切片にオートラジオグラフィー処理を行なった。実験結果によれば、α┣D22┫D2およびα┣D23┫D2サブユニットのmRNAは、ニューロンとグリア細胞いずれにも検出され、グリア細胞についてもアストロサイト、オリゴデンドロサイト共に発現されていた。しかしながら、血管内皮細胞には発現されていなかった。今後、対照実験として、α┣D22┫D2、α┣D23┫D2サブユニットが生化学的には検出されない組織を使って、ハイブリッド法の反応特異生をチェックしてみる予定である。

The cell membrane of Na,K-ATPase and other high-level animal products exists, Na ^ + Na ^ + K ^ + enzyme enzyme can be delivered automatically, and 2 times as much as possible. That is to say, the role of catalyst is different from that of unknown sugar, and that is to say, the effect of catalyst is not known. Recently, cDNAs have been reported in the following categories: α _ 1, α _ 2, α _ 3 (α _ 1, α _ 2, α _ 3). In the tissue of α _ 1, D22, D23, D2, α, D22, D23, D2, D23, D2, D2, D In this study, we did not know if there were any changes in the skin, cells, cells The animal and animal products, Smurd D are mature and mature. After the flow of the fixed liquid is fixed, the skin is sliced (8 μ m thick). CDNA said that the enzyme was cut off, and that the restriction enzyme was cut, and that the D135, D1S, and D1S fragments were used. After you pay for the slices, HCl, and NaCl-Nacitrate liquid, you will need pronase to make sure that you don't know what to do. Glycine, paraformaldehyde, slice, dry and dry. In the second section, the liquid was used to determine the temperature (37 ℃ 24 hours). After rinsing, the formide solution is sliced, washed, dehydrated and dried. Finally, slice, cut, cut, slice, slice, slice. The results show that there is a significant difference between the two groups. The results show that there is no significant difference between the two groups. The results show that there is no significant difference between the two groups. The results show that there is a significant difference between the two groups. The results show that there is a significant difference between the two groups. The results show that there is a significant difference between the two groups. The results show that there is a significant difference between the two groups. The results show that there is a significant difference between the two groups. The vascular endothelial cells and the endothelial cells of the blood vessels were found to be abnormal. In the future, according to the data of the biochemical system, such as D22, D22, D2, D23, D2, D23, D2, D2, D22, D2, D2