权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

クロコウジカビ酸性プロテアーゼAの高分解能X線結晶構造解析

黑曲霉酸性蛋白酶A的高分辨率X射线晶体结构分析

基本信息

批准号：
09760071
负责人：
佐々木宏
金额：
$ 1.54万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

项目摘要

重原子同型置換法により分解能1.4Aで酸性プロテアーゼAの立体構造決定を行うことに成功し、以下のことが明らかとなった。1)本酵素は従来のペプシン型酵素とは全く異なった立体構造を持っており、その基本構造は2枚の大きな逆平行βシ一トが重なり合って形成されている。2)得られた立体構造に基づいて分子表面の静電ポテンシャル計算を行った結果、ペプシン型酵素の触媒残基であるアスパラギン酸に相当する機能をグルタミン酸(分子の活性ポケットの中央部に位置している)が担っていることが予想された。3)ペプシン型酸性プロテアーゼの触媒部位では2個のアスパラギン酸と基質の加水分解反応に必要な水分子がお互いに水素結合を形成していることが知られている。しかし、本酵素にはこのようなペプシン型酵素の触媒残基のもつ水素結合ネットワークは見出されなかった。そのため、本酵素はペプシン型酸性プロテアーゼの特異的阻害剤のDAN,EPNPと反応しないものと考えられる。4)京都工芸繊維大学の小田らは本酵素と50%程度の相同性を持つスキタリジウム酸性プロテアーゼBの化学修飾の結果を基に、酸性プロテアーゼの中にはグルタミン酸を触媒残基とするプロテアーゼが存在する可能性を示唆していたが、本酵素の立体構造解析の結果、彼らの主張する残基は触媒残基とはなりえないことがわかった。ペプチドライブラリ法による本酵素の基質特異性の網羅的探索により、以下のことが明らかとなった。5)本酵素においては、Pl部位でヒスチジンに対する顕著な特異性が弱酸性領域において見られ、P2部位では塩基性アミノ酸残基に対する特異性が見られる。このような基質特異性もペプシン型酵素とは全く異なったものである。

Heavy atom isotype substitution method can decompose 1.4A acid and determine the stereostructure of A. 1) The enzyme is composed of two different types of enzymes, namely, the enzyme has a three-dimensional structure and a basic structure. 2)The results of calculation of electrostatic properties on the surface of the molecule in the three-dimensional structure show that the catalytic residues of the enzyme type have the same function as those of the acid type (the central position of the active group of the molecule). 3) The catalyst site of the acid type catalyst is composed of two parts: the acid and the hydrolysis reaction of the matrix, the necessary water molecules and the water element binding reaction. The enzyme is a complex enzyme that binds to the catalytic residue of the enzyme. The enzyme is a specific inhibitor of DAN,EPNP and other enzymes. 4)Oda, Kyoto University of Science and Technology, has demonstrated the possibility of the existence of acid catalyst residues in the enzyme as a result of chemical modification of the enzyme to the extent of 50%, and the results of stereostructural analysis of the enzyme as a result of chemical modification of the enzyme to the extent of 50% The enzyme was identified as a substrate-specific enzyme. 5) The enzyme has specificity for weak acid domain and P2 site for basic acid residue. The matrix specific enzyme is completely different.