ネズミ糞線虫排泄・分泌液中の防御免疫誘導成分の精製と同定

类圆线虫分泌液中保护性免疫诱导成分的纯化及鉴定

• 批准号: 63570178
• 负责人: 多田 功
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570178/
• 关键词: ネズミ糞線虫; 排泄・分泌抗原; 特異抗体産生; SDS-PAGE; ELISA; 免疫プラーク法

感染ラット小腸より回収したネズミ糞線虫成虫を数回無菌生理的食塩水にて洗浄後、高濃度のストレプトマイシン・ペニシリン液にて滅菌し、1%グルコースを含むRPMI1640培地にて5%CO_2/air、37℃で培養した。培養上清をミリポアフィルターにて濾過し、これを排泄分泌(ES)抗原として用いた。酵素抗体法(ELISA)に用いる場合は炭酸バッファーにて透析、また濃縮する場合は、蒸留水にて透析後、凍結乾燥を行なった。抗原性をテストするために、感染型幼虫(L_3)、成虫(Ad)、成虫のESの各抗原溶液(10μg/ml)をマイクロタイタープレートに感作し、感染後30〜40日目のラット血清のIgG抗体価を測定した。ES抗原では5000倍の力価を示したが、Ad抗原、L_3抗原ではそれぞれ1200倍、5倍であった。限外濾過によってES抗原を分子量30Kで分け、同様にELISA法でどちらの分画に活性があるか調べてみると、分子量30K以上の分画に抗原活性が含まれていることがわかった。更にES抗原を含む溶液にて血清を希釈した競合ELISA法でAd抗原の活性をみると、血清希釈80〜160倍では約50%もの活性の減少がみられた。このことはAd抗原性のかなりの部分がES抗原に依存していることを示唆している。還元型SDSポリアクリルアミド電気泳動法による蛋白質の分析から、ES抗原では分子量45Kから80Kにかけて7本のバンドが認められた。ES抗原を感作したニトロセルロース膜を用いてフィルター免疫プラーク法で、ES抗原特異的IgG抗体産生細胞の動態を追究した。感染後経時的にラットを剖検し、腸間膜リンパ節を採取し、10^6個当りの抗体産生細胞数を計測した。感染後6日目までは正常対照と同じであったが、それ以降、急速に抗体産生細胞が出現し、13日目にピークに達した。その後、漸減したが49日目でも抗体産生細胞が観察された。この抗体産生細胞数の増加と排虫開始時期は一致しており、成虫の排除にES抗原特異抗体が関与していることが強く示唆された。

Infection ラ ッ ト small intestine よ り back 収 し た ネ ズ ミ dung nematode worm を number back to sterile physiological food salt water に て after at high concentrations, の ス ト レ プ ト マ イ シ ン · ペ ニ シ リ ン liquid に て sterilization し, 1% グ ル コ ー ス を containing む RPMI1640 petty に て 5% CO_2 / air, 37 ℃ で cultivate し た. The supernatant for culture is を, リポアフィ, リポアフィ, タ, にて, filtered through <s:1> and <s:1> れを, and the secreted (ES) antigen is excreted through と and て. Enzyme antibody technique (ELISA) に い る occasions は carbon acid バ ッ フ ァ ー に て dialysis, ま た enrichment す は る occasions, steamed leave the water に て after dialysis, freeze drying line を な っ た. Antigenicity を テ ス ト す る た め に, infected larvae (L_3), adult (Ad), adult の ES の each antigen (10 mu g/ml) solution を マ イ ク ロ タ イ タ ー プ レ ー ト に し sense, 30 ~ 40 days after infection mesh の ラ ッ ト の serum IgG antibody 価 を determination し た. ES antigen で 価を 5000 times the <s:1> force 価を shows <s:1> たが, Ad antigen, L_3 antigen で それぞれ1200 times, 5 times であった. Limit outside filtration に よ っ て ES antigen を molecular weight 30 k で け, with others in に ELISA method で ど ち ら の points draw に active が あ る か adjustable べ て み る と, molecular weight more than 30 k の painting に antigen activity contains が ま れ て い る こ と が わ か っ た. Contains more に ES antigen を む solution に て serum を bush 釈 し た competition ELISA method で Ad antigen の active を み る と 80 ~ 160 times, serum and 釈 で は about 50% も の activity の reduces が み ら れ た. こ の こ と は Ad antigenicity の か な り の part が ES antigen に dependent し て い る こ と を in stopping し て い る. Also type yuan SDS ポ リ ア ク リ ル ア ミ ド 気 swimming method に よ る protein の analysis か ら, ES antigen で は molecular weight 45 k か ら 80 k に か け て 7 this の バ ン ド が recognize め ら れ た. ES antigen を feeling as し た ニ ト ロ セ ル ロ ー を ス membrane with い て フ ィ ル タ ー immune プ ラ ー ク で, ES antigen specific IgG antibody generation cells の dynamic し を investigated た. After infection, a time にラットを section of 検 検 was performed, and the リ <s:1> パ segment of the intestinal membrane was を. A <s:1> and 10^6 <s:1> antibody-producing cells を count was used to measure the た. Eye infection after 6 ま で は with normal polices according と じ で あ っ た が, そ れ to drop and rapid に antibodies produce cell が し, 13 orders に ピ ー ク に da し た. Youdaoplaceholder0 そ followed by gradual reduction of the たが for 49 days で of the で antibody-producing cells が観 observed された. こ の antibody generation cell Numbers is の raised と row worm start period は consistent し て お り, adult の exclude に ES antigen specific antibody が masato and し て い る こ と が く and shown strong sucking さ れ た.