バクテロイデス・ジンジバリスの赤血球凝集素がプロテアーゼ活性を有する可能性の検証

牙龈拟杆菌血凝素具有蛋白酶活性可能性的验证

• 批准号: 63570865
• 负责人: 西方 眞
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
• 财政年份: 1988
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1988 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-63570865/
• 关键词: バクテロイデス; ジンジバリス; 赤血球凝集素; トリプシン様酵素

本研究では、バクテロイデス・ジンジバリス(以下本菌)の赤血球凝集(HA)が、トリプシン様プロテアーゼ活性を有するか否かを確かめるために、Hの精製を試みた。〔方法〕本菌の膜成分を材料とし、ゲル濾過(Biogel A0.5m)、イオン交換クロマト(DEAE-セルロース)、アフィニティークロマト(アルギニンセルロース)の順に精製を行なった。精製に当たってはleupeptinで阻害されるHA画分に着目した。〔結果〕アフィニティーカラムからの溶出に、アルギニンの濃度勾配を用いると、HAはアルギン濃度1〜5mMの範囲で1つのピークとして溶出された。このピークには、benzoyl-Arg p-nitroanilideを水解するトリプシン様酵素も検出された。このピークを、polyacrylamideゲル電気泳動で分析すると、やや幅広い一本の蛋白質バンドが検出され、この位置にHA活性と酵素活性が共に検出された。しかし、SDSを加えた素で分析すると、分子量4.6万の主バンドの他に2〜3本の薄いバンドが検出された。等電点電気泳動では、蛋白質バンド、HA活性、酵素活性のいずれも検出されなかった。このピークのHA活性と酵素活性は、leupeptin、antipain、tosyl-lysine-chloromenthl ketone、p-chloromercuribenzoate、N-ethylmaleimideで共に阻害された。〔考察〕クロマトグラフィー、電気泳動でHA活性と酵素活性は同じ挙動を示したが、両活性が同一分子によって発現されるのか、別分子により発現されるか、両分子が結合しているのかは明らかにならなかった。両活性とも、同じ阻害剤で阻害される事より、赤血球凝集にはトリプシン様酵素活性が関与している事はほぼ間違いないと言える。〔展望〕本研究では、赤血球凝集にプロテアーゼが関与するという興味ある事実が導かれた。今後は、電気泳的には均一な標品を得て、HA活性とトリプシン様酵素活性が同一分子上にあるのか否かを明らかにするとともに、この酵素活性が、赤血球凝集反応の過程でどの様に関与するのかについても明らかにして行きたい。

In this study, the hemagglutination (HA) activity of this bacterium was tested. [Method] The membrane components of the strain were purified by filtration (Biogel A0.5m), DEAE exchange (DEAE), and purification. The HA was designed to prevent leupeptin from leaking out. [Results] Dissolution, concentration matching, HA concentration 1 ~ 5mM This enzyme is responsible for the hydrolysis of benzoyl-Arg p-nitroanilide. The protein was detected by electrophoresis analysis of polyacrylamide and HA activity. In addition, SDS analysis showed that the molecular weight of 46,000 main components and other 2 ~ 3 basic components were detected. Isoelectric mobility, protein expression, HA activity, enzyme activity, and enzyme activity were detected. HA activity, enzyme activity, leupeptin, antipain, tosyl-lysine-chloromentl ketone, p-chloromercuribenoate, N-ethylmaleimide were all inhibited. [Investigation] HA activity and enzyme activity are similar to each other, and the activity of HA and enzyme is similar to each other. The activity of the enzyme is related to the activity of the inhibitor, the inhibitor, the hemagglutination inhibitor and the inhibitor. [Outlook] This study is about red blood cell aggregation. In the future, even standard samples will be obtained, HA activity and enzyme activity will be changed from one molecule to another, and enzyme activity will be changed from one molecule to another, and the process of hemagglutination will be changed from one molecule to another.

项目成果

Makoto,Nishikata: Microbiology and Immunology. 33. 75-80 (1989)

西片诚：微生物学和免疫学。